W: Brother ، تم الانتهاء من النسخ العكسي ، وأخيرًا الخطوة الأخيرة - PCR الكمي الفلوري!يا أخي ، ما هو PCR الكمي في الوقت الحقيقي؟
م: هل تعرف تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) دائمًا ، أليس كذلك؟
W: تعلمون ، PCR هو تفاعل البلمرة المتسلسل ، وهي تقنية تزيد من الحمض النووي!
م: إنها طريقة فنية تقريبًا لتضخيم التسلسل المستهدف لأكثر من مليون مرة من خلال بادئات محددة ، ولكن هذا يشير فقط إلى وجود أو عدم وجود تسلسل الهدف ، ولا يمكن تحديد مقدار القالب الأولي.PCR الكمي الإسفار هو طريقة تقنية تم تطويرها لحل هذه المشكلة.تشير PCR في الوقت الحقيقي وكمية PCR (qPCR) بشكل عام إليها.
W: يكمن الاختلاف عن PCR العادي في القياس الكمي للفلورة؟
م: نعم ، أي في مرحلة التمديد لكل دورة PCR ، يتم الكشف عن شدة إشارة التألق ، ويمكن حساب مقدار القالب الأولي وفقًا لتغير شدة الإشارة.
و: إنه شعور معقد للغاية!هل يجب علي حساب هذا بنفسي؟
م: هذا يتطلب منك أن تتعلم ببطء ، فمن الأفضل أن تكون قادرًا على فهم المبدأ.يمكنك الآن التركيز على قيمة CT أولاً ، وهي بيانات تجريبية بديهية نسبيًا ، ويتوافق حجمها مع حجم مقدار القالب الأولي.هناك أيضًا رسوم بيانية مثل منحنيات التضخيم ومنحنيات الانصهار.لهم القول الفصل فيما إذا كانت تجربتك ناجحة أم لا.
و: أوه ، أخي.ثم سأقوم بتجربة qPCR!
م: انتبه بشكل خاص إلى عدم إضافة قوالب إلى منطقة الكاشف ، وإلا فسيكون المزيج غير المستخدم ملوثًا بسهولة!
W: فهمت ذلك!

الوقت الحقيقي PCR Easyᵀᴹ-SYBR Green I Kit

كفاءة أعلى ، وخصوصية أكبر
حساسية عالية ، توافق جيد