1. كشف امتصاص محلول الحمض النووي الريبي

تمثل الامتصاصية عند 280 و 320 و 230 و 260 نانومتر قيم الحمض النووي والخلفية (تعكر المحلول) وتركيز الملح والمواد العضوية مثل البروتين على التوالي.بشكل عام ، انظر فقط إلى OD260 / OD280 (نسبة ، R).عندما 1.8 ~ 2.0 ، نعتقد أنه يمكن تحمل تلوث البروتين أو المواد العضوية الأخرى في الحمض النووي الريبي ، ولكن يجب ملاحظة أنه عند استخدام Tris كمخزن مؤقت لاكتشاف الامتصاص ، قد تكون قيمة R أكبر من 2 (بشكل عام يجب أن تكون <2.2).عندما يكون R <1.8 ، يكون تلوث البروتين أو المواد العضوية الأخرى في المحلول أكثر وضوحًا ، ويمكن تحديد مصير الحمض النووي الريبي وفقًا للاحتياجات.عندما يكون R> 2.2 ، فهذا يعني أن الحمض النووي الريبي قد تحلل بالماء إلى حمض نووي واحد.
 
2. نمط الكهربي من الحمض النووي الريبي
بشكل عام ، يتم استخدام هلام التحوير في الرحلان الكهربائي للحمض النووي الريبي ، ولكن إذا كان فقط للكشف عن جودة الحمض النووي الريبي ، فإن الجل غير ضروري ، ويمكن استخدام هلام الاغاروز العادي.الغرض من الرحلان الكهربائي هو الكشف عن سلامة نطاقي 28S و 18S ونسبتها ، أو سلامة مسحة الرنا المرسال.بشكل عام ، إذا كانت نطاقات 28S و 18S ساطعة وواضحة وحادة (بالإشارة إلى حواف النطاقات واضحة) ، وكان سطوع 28S أكثر من ضعف سطوع نطاق 18S ، فإننا نعتبر جودة RNA جيدة.
ما سبق هما الطريقتان اللتان نستخدمهما بشكل شائع ، ولكن لا يمكن لأي من هاتين الطريقتين أن تخبرنا بوضوح ما إذا كان هناك RNase متبقي في محلول RNA.إذا كانت هناك كمية صغيرة جدًا من RNase في المحلول ، فمن الصعب علينا اكتشافها بالطريقة المذكورة أعلاه ، ولكن يتم تنفيذ معظم التفاعلات الأنزيمية اللاحقة عند درجة تزيد عن 37 درجة ولفترة طويلة.بهذه الطريقة ، إذا كانت هناك كمية صغيرة جدًا من RNase في محلول RNA ، فستكون هناك بيئة مناسبة جدًا ووقت للعب دورها في التجارب اللاحقة ، وبالطبع ستكون التجربة باردة في هذا الوقت.نقدم أدناه طريقة يمكن أن تؤكد ما إذا كان هناك RNase متبقي في محلول RNA.
 
3. اختبار الحفاظ على الحرارة
وفقًا لتركيز العينة ، اسحب اثنين 1000 نانوغرام من الحمض النووي الريبي من محلول الحمض النووي الريبي وأضفه إلى أنبوب طرد مركزي سعة 0.5 مل ، وقم بتكميله بمخزن مؤقت pH 7.0 Tris إلى حجم إجمالي يبلغ 10 ميكرولتر ، ثم أغلق غطاء الأنبوب.ضعي إحداها في حمام مائي بدرجة حرارة ثابتة عند 70 درجة مئوية واحتفظي بها دافئة لمدة ساعة.تم تخزين الجزء الآخر في ثلاجة -20 درجة مئوية لمدة 1 ساعة.عندما يحين الوقت ، قم بإزالة عينتين للرحلان الكهربائي.بعد اكتمال الرحلان الكهربي ، قارن بين نطاقي الرحلان الكهربي.إذا كانت نطاقات الاثنين متسقة أو ليس لها فرق كبير (بالطبع ، نطاقاتها تفي أيضًا بالشروط الواردة في الطريقة 2) ، فهذا يعني أنه لا يوجد تلوث RNase متبقي في محلول الحمض النووي الريبي ، وجودة الحمض النووي الريبي جيدة جدًا.على العكس من ذلك ، إذا أظهرت العينة المحتضنة عند 70 درجة مئوية تدهورًا واضحًا ، فهذا يشير إلى وجود تلوث RNase في محلول RNA.
 
2 الطرق والتقنيات التجريبية لاستخراج الحمض النووي الريبي
المشاكل التي نواجهها غالبًا عند استخراج الحمض النووي الريبي هي: (1) إنتاجية الحمض النووي الريبي منخفضة ؛(2) يحتوي الحمض النووي الريبي على تلوث ملح خطير ؛(3) يحتوي الحمض النووي الريبي على تلوث خطير بالمذيبات العضوية ؛(4) تدهور العينة ومشاكل أخرى
 
1. يشيع استخدام كواشف استخراج الحمض النووي الريبي
طريقة isothiocyanate guanidine وطريقة Trizol هي الطرق الأكثر استخدامًا لاستخراج إجمالي الحمض النووي الريبي من الأنسجة الحيوانية والخلايا الحيوانية.إنها مناسبة بشكل خاص للعينات الصغيرة والأنسجة التي يصعب استخلاصها ، مثل استخراج الحمض النووي الريبي الكلي من جلد الأرانب والأنسجة الضامة الحيوانية ؛بالإضافة إلى ذلك ، يمكن أيضًا استخدام Trizol ، باعتباره كاشف تحلل متعدد الأغراض ، لاستخراج الأنسجة النباتية والبكتيريا والفطريات والأنسجة الأخرى.بالنسبة للأنسجة النباتية التي تحتوي على السكريات والبوليفينول ، مثل الكاميليا ، وأوراق الشاي ، وبذور اللفت ، وما إلى ذلك ، يمكن أيضًا استخدام طريقة CTAB لاستخراج إجمالي الحمض النووي الريبي.

كطريقة تقليدية ، تحظى طريقة العمود المزدوج بشعبية كبيرة أيضًا بسبب تشغيلها بدرجة حرارة عادية ، ولا حاجة لإضافة RNase ، والسلامة - لا يوجد الكلوروفورم والفينولات والكواشف العضوية الأخرى للاستخراج.(المنتجات الموصى بها )