مجموعة عزل الحمض النووي الريبي الكلي للنباتات مجموعة Purificaiton للحمض النووي الريبي للنبات منخفض السكريات والبوليفينول
تحديد
50 الإعدادية ، 200 الإعدادية
تستخدم المجموعة عمود الدوران والصيغة التي طورتها شركة Foregene ، والتي يمكنها استخراج الحمض النووي الريبي الكلي عالي النقاء وعالي الجودة من أنسجة نباتية مختلفة ذات محتوى منخفض من السكريات والبوليفينول.بالنسبة لعينات النباتات التي تحتوي على نسبة عالية من السكريات أو البوليفينول ، يوصى باستخدام مجموعة Plant Total RNA Isolation Plus Kit للحصول على نتائج أفضل لاستخراج الحمض النووي الريبي.توفر المجموعة عمود تنظيف الحمض النووي الذي يمكنه بسهولة إزالة الحمض النووي الجيني من المادة الطافية ومحللة الأنسجة.يمكن لعمود الحمض النووي الريبي فقط ربط الحمض النووي الريبي بشكل فعال.يمكن للمجموعة معالجة عدد كبير من العينات في نفس الوقت.
لا يحتوي النظام بأكمله على RNase ، لذلك لن يتحلل الحمض النووي الريبي المنقى.يمكن أن يضمن Buffer PRW1 و Buffer PRW2 أن الحمض النووي الريبي الذي تم الحصول عليه غير ملوث بالبروتين والحمض النووي والأيونات والمركبات العضوية.
مكونات الطقم
| المخزن المؤقت PSL1 ، المخزن المؤقت PS ، المخزن المؤقت PSL2 |
| المخزن المؤقت PRW1 ، المخزن المؤقت PRW2 |
| RNase خالية ddH2O ، عمود تنظيف الحمض النووي |
| عمود RNA فقط |
| تعليمات |
الميزات والمزايا
■ التشغيل في درجة حرارة الغرفة (15-25 درجة مئوية) طوال العملية برمتها ، بدون حمام ثلجي وطرد مركزي بدرجة حرارة منخفضة.
■ مجموعة كاملة خالية من RNase ، لا داعي للقلق بشأن تدهور الحمض النووي الريبي.
■ يرتبط عمود تنظيف الحمض النووي على وجه التحديد بالحمض النووي ، بحيث يمكن للمجموعة إزالة تلوث الحمض النووي الجيني بدون إضافة DNase.
■ إنتاجية عالية من الحمض النووي الريبي (RNA): يمكن لعمود RNA فقط والصيغة الفريدة تنقية الحمض النووي الريبي بكفاءة.
■ السرعة: سهل التشغيل ويمكن إتمامه في غضون 30 دقيقة.
■ السلامة: لا يلزم وجود كاشف عضوي.
■ جودة عالية: تتميز شظايا الحمض النووي الريبي المنقى بدرجة نقاء عالية وخالية من البروتين والشوائب الأخرى ، ويمكن أن تلبي العديد من التطبيقات التجريبية النهائية.
تطبيق كيت
إنه مناسب لاستخراج وتنقية إجمالي الحمض النووي الريبي من عينات الأنسجة النباتية الطازجة أو المجمدة (خاصة أنسجة أوراق النبات الطازجة) مع محتوى منخفض من السكريات والبوليفينول.
تدفق العمل
رسم بياني
عالجت مجموعة عزل الحمض النووي الريبي الكلي النباتية بالإضافة إلى 50 مجم من الأوراق الطازجة من السكريات والبوليفينول ، وتم اختبار 5 ٪ من الحمض النووي الريبي المنقى عن طريق الرحلان الكهربائي.
1: الموز
2: الجنكة
3: قطن
4: الرمان
التخزين ومدة الصلاحية
يمكن تخزين المجموعة لمدة 12 شهرًا في درجة حرارة الغرفة (15-25 درجة مئوية) في بيئة جافة ، و 2-8 درجات مئوية لفترة أطول (24 شهرًا).
يمكن تخزين المخزن المؤقت PSL1 في 4 ℃ لمدة شهر واحد بعد إضافة 2-هيدروكسي-1-إيثانثيول (اختياري).
دليل تحليل المشكلة
التحليل التالي للمشاكل التي قد تواجهها فيإجمالي النباتRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.
عمود الدوران مسدود
سيؤدي انسداد عمود الدوران إلى تقليل إنتاجية الحمض النووي الريبي أو حتى عدم إمكانية تنقيته للحصول على الحمض النووي الريبي ، وستكون جودة الحمض النووي الريبي التي تم الحصول عليها منخفضة.
تحليل السبب المشترك:
1. لم يتم كسر العينة بالكامل.
يمكن أن يؤدي تجزئة العينة غير المكتملة إلى إعاقة عمود تنظيف الحمض النووي ، مما قد يؤثر أيضًا على إنتاجية الحمض النووي الريبي وجودته.نوصي عند إجراء تفتيت العينة بطحن كميات كافية من النيتروجين السائل بسرعة لتفتيت الأنسجة مثل جدران الخلايا وأغشية الخلايا للعينات قدر الإمكان.بالنسبة لعينات نباتية من عديد السكاريد البوليفينول ، نوصي باستخدام Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
2. ينضح عمود تنظيف الحمض النووي المعزول طافًا ، ونضح بيليه حطام الخلية المحتمل.
يمكن أن تسد بيليه حطام الخلية المستنشق عمود الحمض النووي الريبي فقط أثناء إجراءات امتزاز الحمض النووي الريبي (انظر الخطوة 5 من الإجراء ، الخطوة 6 من إجراء بوليفينول السكاريد).نوصي بضرورة توخي الحذر عند شفط هذا المادة الطافية لتجنب استنشاق حطام الخلية.
3. الكمية الأولية للعينة كبيرة جدًا.
سيؤدي الاستخدام المفرط للعينة إلى تجزئة غير كاملة للعينة أو تحلل غير كامل للخلايا بواسطة Buffer PRL1 أو Buffer PSL1 ، مما يؤدي إلى انسداد عمود التنقية لعمليات التنقية.يبلغ الحد الأقصى الأولي لمجموعة عزل الحمض النووي الريبي في النبات 50 مجم لكل تنقية واحدة لعينة تم تشغيلها.للحصول على عينات نباتية من عديد السكاريد البوليفينول ، نوصي بتجربة مجموعة Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
4. درجة حرارة جهاز الطرد المركزي منخفضة للغاية.
عزل وتنقية الحمض النووي الريبي بالكامل باستثناء تعطيل النيتروجين السائل لأنسجة العينة ، يتم تنفيذ جميع الخطوات في درجة حرارة الغرفة (20-25 درجة مئوية).تحتوي بعض أجهزة الطرد المركزي ذات درجات الحرارة المنخفضة على درجات حرارة أقل من 20 درجة مئوية ، مما قد يؤدي إلى انسداد في عمود تنظيف الحمض النووي و / أو عمود الحمض النووي الريبي فقط.في حالة حدوث ذلك ، قم بتعيين درجة حرارة جهاز الطرد المركزي إلى 20-25 درجة مئوية وقم بتدفئة خليط التحلل مسبقًا و / أو إضافة مادة طافية لفصل الإيثانول إلى 37 درجة مئوية.
لا يوجد RNA مستخرج أو عائد RNA منخفض
عادة ما يكون هناك العديد من العوامل التي تؤثر على كفاءة الاسترداد ، مثل: عينة محتوى الحمض النووي الريبي ، طريقة التشغيل ، حجم الشطف ، إلخ.
تحليل الأسباب الشائعة على النحو التالي:
1- تم إجراء حمام جليدي أو طرد مركزي بدرجة حرارة منخفضة (4 درجات مئوية) أثناء العملية.
اقتراح: تعمل في درجة حرارة الغرفة (15-25 درجة مئوية) في العملية برمتها ، لا تقم بعمل حمام جليدي وطرد مركزي بدرجة حرارة منخفضة.
2.تم تدهور الحمض النووي الريبي بسبب الحفظ غير السليم للعينة أو الحفاظ على العينة على المدى الطويل.
توصية: يجب تجميد العينات التي تم جمعها حديثًا بسرعة في النيتروجين السائل ، ثم تخزينها في درجة حرارة -80 درجة مئوية لفترة طويلة ، وتجنب تكرار تجميد العينات وإذابتها ؛أو على الفور نقع العينات في محلول RNAlater استقرار RNA (عينات حيوانية).
3.يؤدي عدم كفاية تفتيت وتحلل العينة إلى انسداد عمود التنقية.
اقتراح: عند طحن النسيج ، يرجى التأكد من أن النسيج مطحون بشكل كافٍ ، ونقله بسرعة إلى Buffer PSL1 المُعد مسبقًا (تأكد من إضافة النسبة الصحيحة من β-ME ، راجع الخطوة 1 من الإجراء).
4-تمت إضافة eluent بشكل غير صحيح.
اقتراح: تأكد من أن ddH خالٍ من RNase2يقطر O في منتصف غشاء عمود التنقية.
لم يتم إضافة الحجم الصحيح للإيثانول المطلق إلى Buffer PSL2 أو Buffer PRW2.
اقتراح: يرجى اتباع التعليمات وإضافة الحجم الصحيح من الإيثانول المطلق إلى Buffer PSL2 و Buffer PRW2 وتخلط جيدًا قبل استخدام المجموعة.
6- كمية عينة الأنسجة غير مناسبة.
اقتراح: استخدم 50 ملغ من الأنسجة لكل 500 ميكرولتر من Buffer PSL1.سيؤدي استخدام الكثير من الأنسجة إلى تقليل كمية الحمض النووي الريبي المستخرج ، كما سيتم تقليل نقاء الحمض النووي الريبي الناتج.نوصي بشدة ألا تتجاوز جرعة العينة الأولية 50 مجم لكل عملية استخراج الحمض النووي الريبي.
7. حجم شطف غير مناسب أو شطف غير كامل.
اقتراح: الحجم الصغير لعمود التنقية هو 50-200 ميكرولتر ؛إذا كان تأثير الشطف غير مرضٍ ، فمن المستحسن تمديد الوقت في درجة حرارة الغرفة بعد إضافة ddH المسخن الخالي من RNase2يا ، مثل 5-10 دقيقة.
8- يحتوي عمود التنقية على بقايا إيثانول بعد الغسيل باستخدام Buffer PRW2.
اقتراح: إذا تم الطرد المركزي للأنبوب الفارغ لمدة دقيقة واحدة ولا يزال هناك إيثانول متبقي بعد الغسيل في Buffer PRW2 ، يمكنك زيادة وقت الطرد المركزي للأنبوب الفارغ إلى دقيقتين ، أو وضع عمود التنقية في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق لإزالة الإيثانول المتبقي تمامًا.
9- تم استخدام العدة بشكل غير صحيح.
اقتراح: بالنسبة لعينات نباتية من عديد السكاريد متعدد الفينول ، فإن استخدام مجموعات شائعة مثل مجموعة عزل الحمض النووي الريبي الكلي للنبات قد لا يكون قادرًا على الحصول على عينات مثالية من الحمض النووي الريبي.نوصيك باستخدام Plant Total RNA IsolationKit Plus ، المصمم خصيصًا لعينات نبات البوليفينوليك متعدد السكاريد.مجموعة مطورة خصيصًا لاستخراج الحمض النووي الريبي من عينات نباتات البوليفينول وعديد السكاريد.
قيمة OD260 / OD280 منخفضة
شطف الحمض النووي الريبي مع ddH2ينتج عن O والمستخدم في قراءات مقياس الطيف الضوئي قيم منخفضة لـ OD260 / OD280.نوصي باستخدام 10 مم Tris-HCl ، ودرجة الحموضة 7.5 (بدلاً من ddH الخالي من RNase2O لاستخراج الحمض النووي الريبي) للحصول على قيم OD260 / OD280 الصحيحة نسبيًا ، راجع "فحوصات تركيز وتنقية الحمض النووي الريبي" في الصفحة 19.
يتحلل الحمض النووي الريبي المنقى
ترتبط جودة الحمض النووي الريبي المنقى بعوامل مثل حفظ العينة ، وتلوث الحمض النووي الريبي ، والتلاعب.
تحليل الأسباب الشائعة:
1- عدم تخزين عينات الأنسجة في الوقت المناسب بعد جمعها.
توصية: إذا لم يتم استخدام عينات الأنسجة في الوقت المناسب بعد الجمع ، فيرجى تخزينها في نيتروجين سائل عند درجة حرارة منخفضة على الفور أو نقلها إلى -80 درجة مئوية للتخزين طويل الأجل بعد التجميد السريع في النيتروجين السائل ، أو غمر العينات على الفور في محلول RNA المثبت RNA (عينات الحيوانات).لاستخراج الحمض النووي الريبي ، حاول استخدام عينات الأنسجة التي تم جمعها حديثًا.
2- تكرار التجميد والذوبان لعينات الأنسجة.
اقتراح: عند تخزين عينات الأنسجة ، من الأفضل تقطيعها إلى قطع صغيرة لحفظها ، وإخراج جزء منها عند استخدامها لتجنب تدهور الحمض النووي الريبي الناجم عن التجميد المتكرر والذوبان المتكرر للعينات.
3.RNase يتم إدخاله في غرفة العمليات أو عدم ارتداء القفازات والأقنعة التي تستخدم لمرة واحدة وما إلى ذلك.
اقتراح: من الأفضل إجراء تجارب استخراج الحمض النووي الريبي في عمليات RNA منفصلة ، ويجب تنظيف طاولة المختبر قبل التجربة ، ويجب ارتداء القفازات والأقنعة التي يمكن التخلص منها أثناء التجربة لتجنب تدهور الحمض النووي الريبي الناجم عن إدخال RNase إلى أقصى حد.
4 الكاشف ملوث بـ RNase أثناء الاستخدام.
اقتراح: استبدل بسلسلة جديدة من مجموعات استخراج الحمض النووي الريبي للنباتات للتجارب ذات الصلة.
5- أنابيب الطرد المركزي وأطراف الماصة المستخدمة في معالجة الحمض النووي الريبي ملوثة بـ RNase.
اقتراح: تأكد من أن أنابيب أجهزة الطرد المركزي ، وأطراف الماصة ، والماصات ، وما إلى ذلك المستخدمة في استخراج الحمض النووي الريبي ، كلها خالية من RNase.
كتيبات التعليمات:
دليل تعليمات مجموعة أدوات عزل الحمض النووي الريبي الكلي للمصنع
