المؤلفون: Wang Xiaoyan، Zhao Eryu

الوحدة: مستشفى Jiaozhou ، مستشفى Dongfang التابع لجامعة Tongji

في الوقت الحاضر ، يعتبر مسحة الحلق نوع العينة الرئيسي لاكتشاف الحمض النووي الممرض في الجهاز التنفسي.هناك أنواع عديدة من حلول حفظ العينات شائعة الاستخدام ، وكلها تحتاج إلى تبريد أو تجميد للنقل والتخزين ؛من الصعب التحكم في العملية الكاملة لدرجات الحرارة المنخفضة أثناء عملية الجمع والنقل ، ومن الصعب ضمان مراقبة الجودة قبل اختبار العينة^[1-2].

RNase (RNase) هو نوكلياز داخلي يحلل الحمض النووي الريبي ، بشكل أساسي يقطع روابط الفسفودايستر بين النيوكليوتيدات.جزيء RNase مستقر للغاية ، وهناك روابط ثاني كبريتيد في الهيكل ، ونشاطه لا يتطلب وجود الكاتيونات ثنائية التكافؤ ، لذلك لا يمكن تغيير طبيعة RNase بسهولة ، ومن السهل إعادة تكوينه حتى بعد ارتفاع درجة الحرارة أو استخدام المميزات.تنقسم RNases إلى داخلية وخارجية.يمكن إطلاق RNases الذاتية في نفس الوقت عند تمزق الخلايا.لذلك ، فإن القضاء على دور RNases الذاتية هو خطوة حاسمة للغاية في عملية استخراج الحمض النووي الريبي.يتم توزيع RNases الخارجية على نطاق واسع.توجد RNases في الهواء وجلد الإنسان والشعر واللعاب ، وهي أسباب مهمة لسهولة تحلل الحمض النووي الريبي.^[3].

الاستعلام عن البيانات

تقترح CANS-CL02-A009 "تطبيق إرشادات اعتماد جودة المختبرات الطبية والكفاءة في مجال التشخيص الجزيئي" في المتطلبات الفنية أنه يجب صياغة معايير جودة المياه المناسبة وفقًا للتطبيق ؛حاويات محكمة الغلق يمكن التخلص منها:

RNase / التصنيف

(1) RNase A

Ribonuclease A (RNase A) ، المشتق من البنكرياس البقري ، هو نوكلياز داخلي يمكنه مهاجمة 3 نهاية بقايا بيريميدين على الحمض النووي الريبي ، وقطع السيتوزين أو اليوراسيل المتكون من النيوكليوتيدات المجاورة.رابطة الفوسفوديستر ، المنتج النهائي للتفاعل هو نيوكليوتيد 3 بيريميدين وأوليغنوكليوتيد مع 3 بيريميدين نيوكليوتيد في النهاية.

(2) RNase T1

مشتق Ribonuclease T1 (RNase T1) من Aspergillus orjzae ، وهو يعمل بشكل خاص على فوسفات 3′-terminal من الجوانين ، ويقع موقع الانقسام بين 3 فوسفات من الجوانين و 5 هيدروكسيل من النيوكليوتيدات المجاورة.المنتج النهائي للتفاعل هو 3′guanylic acid وشظايا oligonucleotide مع 3′guanylic acid في النهاية.

(3) RNase H.

تم اكتشاف Ribonuclease H (RNase H) لأول مرة من نسيج الغدة الصعترية ، وتم استنساخ جين الترميز الخاص به في Escherichia coli.يمكن أن تتحلل على وجه التحديد من الحمض النووي: خيوط RNA في الدوبلكس الهجين RNA ، مما يؤدي إلى أليغنوكليوتيدات و mononucleotides بنهايات 3′-OH و 5′-monophosphate ، لا يمكن أن تتحلل DNA أو RNA أحادي أو مزدوج تقطعت بهم السبل.

RNase

الوظيفة والاستخدام

يمكن أن يحفز الريبونوكلياز تحلل الحمض النووي الريبي (RNA) ويمكن تصنيعه بشكل مصطنع.يستخدم المرهم الطبي موضعياً لعلاج الصدمات وآلام المفاصل.وفقًا للتقارير ، يمكن أن يغير الريبونوكلياز استقلاب الخلية المضيفة ، ويمنع تخليق الفيروس ، ويمنع انتشار فيروس الأنفلونزا في المختبر ، ويمنع تكوين اللقاح وفيروس الهربس في أجنة الدجاج.الاستخدام السريري للحقن العضلي الريبونوكلياز اليومي 180 ملغ ، مفيد في علاج التهاب الدماغ الوبائي ، يمكن أن يحفز الريبونوكلياز تحلل الحمض النووي الريبي (RNA) ، ويمكن الآن تصنيعه بشكل مصطنع.يستخدم المرهم الطبي موضعياً لعلاج الصدمات وآلام المفاصل.وفقًا للتقارير ، يمكن أن يغير الريبونوكلياز استقلاب الخلية المضيفة ، ويمنع تخليق الفيروس ، ويمنع انتشار فيروس الأنفلونزا في المختبر ، ويمنع تكوين اللقاح وفيروس الهربس في أجنة الدجاج.الاستخدام السريري للحقن العضلي الريبونوكلياز اليومي 180 ملغ مفيد في علاج التهاب الدماغ الوبائي.

RNase

تعريف المانع

تعريف وحدة مثبط RNase: كمية الإنزيم المطلوبة لتثبيط 50٪ من نشاط 5ng RNase A هي وحدة واحدة.

كيف تعمل مثبطات RNase

غوانيدين أيزوثيوسيانات:

Guanidine isothiocyanate هو مركب عضوي له الصيغة الجزيئية C2H6N4S.يستخدم بشكل رئيسي في الطب البيولوجي ، الكواشف الكيميائية ، إلخ. Guanidine isothiocyanate هو عامل تحليل البروتين ، وغالبًا ما يستخدم كمكون رئيسي لمحلول التحلل في الكواشف التشخيصية الجزيئية.يمكن أن يفسد الأنسجة ، ويدمر بنية الخلية ويفصل الحمض النووي عن البروتين النووي ، وله تمسخ قوي للـ RNase.إنه أكثر مثبطات RNase فعالية في الوقت الحاضر.

TRIzol هو كاشف جديد لاستخراج الحمض النووي الريبي يمكنه استخراج الحمض النووي الريبي الكلي مباشرة من الخلايا أو الأنسجة.يحتوي على مواد مثل الفينول وجوانيدين أيزوثيوسيانات ، والتي يمكن أن تعطل الخلايا بسرعة وتمنع نوكليازات التي تطلقها الخلايا.

(ومع ذلك ، فإن إيزوثيوسيانات الغوانيدين تشكل خطورة على صحة الباحثين في المختبر).

RNasin:

البروتين السكري الحمضي المستخرج من كبد الفئران أو الجلد البشري.Rnasin هو مثبط غير تنافسي لـ RNase ، والذي يمكن أن يرتبط بـ RNases المختلفة لتعطيلها.

(مزيد من التفاصيل: https: //www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hدرجة حرارة عالية:

تعتبر درجة الحرارة المرتفعة أيضًا وسيلة شائعة لتمسخ البروتين.

ثنائي إيثيل بيروكربونات (DEPC):

DEPC هو مثبط قوي للـ RNase ولكنه غير مكتمل ، والذي يمكن أن يثبط نشاط RNase عن طريق الدمج مع حلقة إيميدازول من الأحماض الأمينية من مجموعة RNase النشطة لتفسد طبيعة البروتينات.

مجمع فاناديل ريبونوكليوزيد:

مركب يتكون من أيونات أكسيد الفاناديوم ونيوكليوسيدات ، والذي يرتبط بـ RNase في شكل مواد انتقالية ، والتي يمكن أن تثبط نشاط RNase تمامًا تقريبًا

آخر:

SDS واليوريا والتراب الدياتومي وما إلى ذلك أيضًا لها تأثير مثبط معين على RNase.

مراجعات الخبراء

رئيس تقني لي يوجي

مدير قسم المختبر ، مستشفى Jiaozhou ، مستشفى Dongfang التابع لجامعة Tongji

من أجل منع التحلل البيولوجي لـ RNase الخارجية ، يجب ارتداء الأقنعة والقفازات والقبعات واستبدالها بشكل متكرر أثناء عملية استخراج الحمض النووي الريبي.يجب خبز جميع الأواني الزجاجية في فرن تجفيف على حرارة 200 درجة مئوية لأكثر من ساعتين.يجب معالجة المواد المستخدمة في الخبز ، مثل البلاستيك ، بماء DEPC ، ثم غسلها بالماء المقطر.يجب تخصيص الكواشف أو الأجهزة المستخدمة لاستخراج الحمض النووي الريبي والحفاظ عليه وتحديده إلى الحمض النووي الريبي ، ويجب إنشاء منطقة تشغيل RNA مستقلة.

مراجع:

[1] Smith-Vaughan HC و Binks MJ و Beissbarth J وآخرون.البكتيريا والفيروسات في البلعوم الأنفي مباشرة قبل ظهور التهابات الجهاز التنفسي السفلي الحادة لدى الأطفال الأستراليين الأصليين [J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis، 2018،37 (9): 1785-1794.

[2] فرع مكافحة عدوى المستشفيات التابع لجمعية الطب الوقائي الصيني.مبادئ توجيهية لجمع وفحص العينات الميكروبية السريرية [J].المجلة الصينية لعدوى المستشفيات ، 2018 (20): 3192-3200.

[3] "الاختبار السريري عشرة آلاف لماذا حجم اختبار البيولوجيا الجزيئية"