استخراج الحمض النووي هو مهارة تمهيدية لتجارب البيولوجيا الجزيئية.سواء كان بإمكانه إتقان هذه المهارة واستخدامها بكفاءة ، فقد أصبح أيضًا شرطًا أساسيًا للمجرِّبين اللاحقين للترقية إلى درجة الماجستير التجريبية.
وفقًا لمواد بحثية مختلفة ، ينقسم المجربون بشكل أساسي إلى الأنواع الثلاثة التالية:
تخصص الحيوان ، تخصص النبات ، تخصص الأحياء الدقيقة
سيستمر كل نوع من المجربين في نسخ النسخ لتنمية مجموعة من المهارات الحصرية لعينات محددة.
اليوم ، يريد المحرر إحضار بعض المعدات والدعائم غير المتوفرة من خلال الزنزانة إلى المجربين.معهم ، يمكنك الترقية بسرعة في جميع الاتجاهات.ليس حلمًا أن تصبح إلهًا للتجربة.
هذه المشكلة خاصة بالمجربين المحترفين في النبات (يمكن أيضًا لمجربو المهن الأخرى التعلم منها ~).
أعتقد أن كل جيل من المجربين قد سمع عن طرق استخلاص الأحماض النووية النباتية الكلاسيكية التي تنتقل من جيل إلى جيل من أسلافهم.الأسماء الثلاثة الكبرى في صناعة استخراج النباتات.
على الرغم من أن اللاعبين الكبار ممتازون ، إلا أنهم ما زالوا يعانون من بعض أوجه القصور التي لا مفر منها.
طريقة TRIzol
كثيرا ما تستخدم لاستخراج
RNA
● سامة ومرهقة
● تحتوي على تلوث الجينوم
طريقة CTAB
كثيرا ما تستخدم لاستخراج
الجينومالحمض النووي
● مضيعة للوقت
● من الصعب إزالة CTAB عن طريق الغسيل مقارنة بالملح ، سيكون لكمية صغيرة من المخلفات تأثير كبير على نشاط الإنزيم
طريقة SDS
كثيرا ما تستخدم لاستخراج
بلازميد
● غير مناسب للنباتات ذات المحتوى العالي من السكاريد
● التلوث بالبروتين
في هذا المجتمع الحديث الذي يتميز بتكرارات التحديث ذات السرعة المزدوجة ، لم تعد طرق التشغيل التقليدية قادرة على تلبية احتياجات المجربين ، كما أن ترقية المعدات وشيكة.
تم اختبار عدة استخراج الأحماض النووية من قبل العشرات من المجربين.إنه سهل التشغيل ولا يستخدم أي كواشف سامة ولا يضيف أي إنزيمات.الحمض النووي الذي تم الحصول عليه ذو نقاوة عالية ، وهو أمر ضروري لعملية الاستخراج اليومية للمُجربين المتميزين.
طقم عزل الحمض النووي الريبي Foregene
هنا ، سأكشف أيضًا عن تقنية تشغيل خفية للقائمين بالتجربة ، وهي اختيار طريقة الاستخراج المناسبة وفقًا لنوع النبات (طريقة تحديد نوع النبات في نهاية المقال!) ، لأن بعض السكريات النباتية والبوليفينول عالية المحتوى ، والطرق التقليدية قاتلة.لا يكفي للسيطرة.
حسنًا ، إنه هكذا ...
ركعت طريقة TRIzol مباشرة تحت عينات تحتوي على مستويات عالية من السكريات والبوليفينول مثل أوراق الموز وأوراق الجنكة وأوراق القطن.
لهذا الغرض ، طورت Foregene أداتين فعالتين للمُجربين.يمكن لمجموعة استخراج الحمض النووي الريبي للنبات مع محتوى منخفض من السكاريد والبوليفينول ومحتوى عالي من السكاريد والبوليفينول أن يقتل الأعداء بطريقة مستهدفة ، بحيث لا يخاف المجربون من النباتات المختلفة.فقط قم بتغيير المعدات مباشرة!
بالإضافة إلى الحاجة إلى ترقية طريقة الاستخراج ، يجب أيضًا ترقية عمليات المعالجة المسبقة للعينة.
بسبب التركيب الخاص لعينات النباتات ، فإن الجذور والسيقان الأكثر صلابة لبعض النباتات يصعب طحنها وسحقها بالتساوي.
في صناعة الطحن ، يستخدم حوالي 80٪ من الناس النيتروجين السائل للطحن ، بينما يستخدم أقل من 20٪ الطحن الكهربائي وتذبذب حبة الطحن.
على الرغم من أن طحن النيتروجين السائل رخيص الثمن وسهل الاستخدام ، إلا أنه يمثل كابوسًا للمُجرِّبين الذين يحتاجون إلى عينة كبيرة للطحن في كل مرة وجهد!إذا لم يتم تنظيف الملاط ، فسوف يتسبب ذلك في حدوث تلوث متبادل بين العينات.
يختلف تأثير الطحن الكهربائي من شخص لآخر ، وسيكون لعادات التشغيل للقائمين بالتجربة تأثير أكبر على سلامة الحمض النووي ، كما أن التشغيل بدرجة حرارة منخفضة مطلوب إذا لزم الأمر.
لذلك ، يمكن اعتبار تذبذب حبة الطحن بمثابة معدات الطحن البسيطة والفعالة الحالية.
تشمل أوضاع التذبذب الشائعة التذبذب الرأسي والتذبذب الأفقي الترددي وثلاثي الأبعاد (التذبذب الأفقي).ومع ذلك ، فإن كسارة نسيج Foregene تخترق النموذج الحالي وتعتمد طريقة تذبذب 4D جديدة لجعل عملية الطحن أكثر اتساقًا.
تلبية متطلبات العينة المختلفة ، وسهل التشغيل
تقنية التكسير رباعية الأبعاد الفريدة ، تمت زيادة كفاءة التكسير بنسبة 20٪
العينة مغلقة تمامًا ، ولا يوجد تلوث متبادل
هادئ ، ≤56 ديسيبل
قارن نتائج التجربة بموجة ~
عينة الاختبار: 50 ملغ من أوراق القمح (نسبة منخفضة من السكريات والبوليفينول)
استخراج نوع الحمض النووي: RNA
كمية البقعة: 5 ميكرولتر
مجموعة الاستخراج المستخدمة هي مجموعة استخراج الحمض النووي الريبي الكلي لمصنع Foregene (RE-05011)
بمقارنة البيانات والرسم البياني للرحلان الكهربائي ، يمكن ملاحظة أن تركيز ونقاء الحمض النووي الريبي المستخرج بعد آلة الطحن أعلى من تركيز النيتروجين السائل.في الوقت نفسه ، نظرًا لأن آلة طحن يمكن أن تكسر العينة بشكل كامل ، يمكن استخراج الحمض النووي الريبي الصغير بشكل أفضل ويمكن الحفاظ على سلامة الحمض النووي الريبي.
عينة الاختبار: 50 ملغ من أوراق الجنكة (نسبة عالية من السكاريد والبوليفينول)
استخراج نوع الحمض النووي: RNA
كمية البقعة: 5 ميكرولتر
باستخدام Foregene Polysaccharide Plant Polyphenol Plant Total RNA (RE-05021)
ألقِ نظرة على هذه المجموعة من العينات التي تحتوي على نسبة عالية من السكريات والبوليفينول.التأثير أكثر وضوحا.بنفس النقاوة ، فإن تركيز الحمض النووي الريبي للطحن الآلي هو ما يقرب من 5 أضعاف تركيز طحن النيتروجين السائل ، ولا يزال الحمض النووي الريبي الصغير مرئيًا بشكل ضعيف ~
إذا شعرت أن أيًا من المعدات المذكورة أعلاه ليس سريعًا بما يكفي ، فيجب على المحرر أن يأتي بأفضل المعدات!
سلسلة النبات المباشر PCR
الميزة الفريدة لهذه المعدات هي أن أوراق النبات أو البذور لا تحتاج إلى طحن وكسر ، بل يتم إلقاؤها مباشرة في أنبوب EP للتحلل ، ويمكن استخدام خليط التحلل الناتج كقالب لتفاعل PCR.انها بسيطة مثل خطوة واحدة أسرع!في الوقت نفسه ، تم تجهيز سلسلة PCR المباشرة من نباتات Foregene بنظام مكافحة التلوث UNG ، بحيث لم يعد المجربون قلقين بشأن تلوث الهباء الجوي في المختبر ويمكنهم بسهولة إجراء التجربة.
نصائح الحكم:
كيف نحكم ما إذا كان نبات بوليفينول عديد السكاريد
خذ حوالي 20 ملغ من كتلة الأنسجة وضعها في أنبوب طرد مركزي نظيف 1.5 مل ، أضف 200ul 200mM محلول هيدروكسيد الصوديوم ، ضعه عند 95 ℃ لمدة 10 دقائق ، لاحظ تغير اللون بعد التحلل
1. إذا كان لون المحللة أخضر أو أصفر فاتح ، فهذا يعني أن محتوى بوليفينول الأنسجة منخفض ، ويوصى باستخدام سلسلة Foregene Plant
2. إذا كان اللايسيت أصفر بني أو أحمر بني ، فهذا يعني أن محتوى بوليفينول الأنسجة مرتفع ، ويوصى باستخدام Foregene Polysaccharide Polyphenol Plant Plus Series
الوقت ما بعد: 20 أغسطس - 2021
