التحليل التالي للمشاكل المحتملة فيفحوىمسحة /اتفاقية التجارة الحرة card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

عمود التنقية مسدود

في هذه المجموعة ، في عملية استخراج الحمض النووي الجيني ، يتم امتصاص عمود التنقية مباشرة على عينة خليط التحلل الأنزيمي بدون خطوة الطرد المركزي ، وقد يتم حظر عمود التنقية بسبب الإنزيم غير الكامل واللزوجة العالية للعينة.

الأسباب المحتملة التالية هي كما يلي:

1. عدم اكتمال الهضم الأنزيمي لعينات الأنسجة.

توصية: يمكن تمديد وقت معالجة العينة لبروتياز Foregene بشكل مناسب أو يمكن أخذ المادة الطافية بعد الطرد المركزي عند 12000 دورة في الدقيقة (~ 13400× ز) لمدة 5 دقائق.

2. الإفراط في استخدام عينات الأنسجة أو الأنسجة الكبيرة.

توصية: من الأفضل ألا تتجاوز 1فحوى مسحة في العينةإذا كانت العينة كبيرة جدًا ، فقم بزيادة جرعة Buffer ST1 ، Foregene Protease ، المخزن المؤقت ST2 وفقًا لذلك.

3. لزوجة العينة عالية جدا.

توصية: يمكن تخفيف العينات بشكل مناسب باستخدام 10 ملي مولار من Tris-HCl قبل استخراج الحمض النووي الجيني.

4. تم امتصاص أجزاء من بطاقة الدم.

توصية: يمكن تمديد وقت الطرد المركزي العابر للخطوة 6 من الاستخراج الجيني لبقعة الدم (بطاقة FTA) بشكل مناسب.

غلة منخفضة أو عدم وجود حمض نووي

غالبًا ما توجد مجموعة متنوعة من العوامل التي تؤثر على إنتاجية الحمض النووي الجيني ، بما في ذلك أصل العينة ، وظروف تخزين العينة ، وإعداد العينة ، والتلاعب ، وما إلى ذلك.

لا يمكن الحصول على الحمض النووي الجيني أثناء الاستخراج

الأسباب المحتملة هي كما يلي:

1. يؤدي الحفظ غير السليم للعينات أو التخزين لفترة طويلة إلى تدهور الحمض النووي الجيني.

توصية: يفضل أخذ عينات جديدة من المسحات الفموية ، ولا ينصح باستخدام المسحات المحفوظة في عمليات استخراج الحمض النووي الجيني ؛يجب أن تضمن عينات بقعة الدم أن الجودة مؤهلة ويجب ألا يكون وقت التخزين طويلاً جدًا.

2. قد يؤدي استخدام الأنسجة القليل جدًا إلى عدم استخراج الحمض النووي الجيني المقابل.

توصية: اتبعبوكاتعليمات أخذ عينات المسحة في دليل العملية ، وامسح أكبر عدد ممكن من المرات بحيث يمكن ربط عدد كافٍ من الخلايا بالمسحة الفموية لاستخراج الحمض النووي الجيني ؛لسحب عينة بقعة الدم ، يمكن زيادة منطقة قطع بقعة الدم بشكل مناسب.

3. يتم حفظ Foregene Protease بشكل غير صحيح ، مما يؤدي إلى انخفاض نشاطه أو تعطيله.

توصية: تأكيد شروط التخزينتم العثور على Foregene Protease أو استبداله بـ Foregene Protease جديد للتفاعل الأنزيمي.

4. الحفظ غير السليم للمجموعة أو وقت التخزين طويل جدًا ، مما يؤدي إلى تعطل بعض المكونات في المجموعة.

توصية: شراء جديدفحوى مسحة الحمض النوويعزل عدة للإجراءات ذات الصلة.

5. لا يضيف العازلة WB الإيثانول المطلق.

توصية: تأكد من أن المخزن المؤقت WB يضيف الحجم الصحيح من الإيثانول المطلق.

6. لم يتم إضافة eluent بشكل صحيح إلى فيلم السيليكون.

التوصية: أضف 65درجة مئويةيسقط eluent المُسخَّن مسبقًا في منتصف غشاء السيليكون ويترك في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق لزيادة كفاءة الشطف.

Lالدنا الجينومي العائد معزول

الأسباب المحتملة التالية هي كما يلي:

1. يؤدي الحفظ غير السليم للعينات أو التخزين لفترة طويلة إلى تدهور الحمض النووي الجيني.

توصية: يفضل أخذ عينات من المسحات الفموية حديثًا ، ويجب عدم استخدام المسحات المحفوظة لاستخراج الحمض النووي الجيني.

2. إذا كانت كمية عينة الأنسجة صغيرة جدًا ، فسيكون محتوى الحمض النووي الجيني المستخرج أقل.

توصية: اتبع تعليمات أخذ عينات المسحة الفموية في دليل التشغيل ، وامسح أكبر عدد ممكن من المرات بحيث يمكن ربط خلايا كافية بالمسحة الفموية لاستخراج الحمض النووي الجيني.

3. يتم حفظ Foregene Protease بشكل غير صحيح ، مما يؤدي إلى انخفاض نشاطه أو تعطيله.

توصية: تأكيد شروط التخزينthe Foregene Protease أو استبداله بآخر جديد Foregene Protease للتفاعل الأنزيمي.

4. مشاكل Eluent.

توصية: استخدم Buffer EB للشطف ؛في حالة استخدام ddH₂O أو شطفات أخرى ، تأكد من أن الرقم الهيدروجيني للشطف بين 7.0-8.5.

5. لم يتم إضافة الشذبة بشكل صحيح بالتنقيط.

التوصية: أضف قطرات eluent إلى منتصف غشاء السيليكون واتركها في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق لزيادة كفاءة الشطف.

6. سائل الشطف يتراكم القليل جدًا.

توصية: استخدم eluent لشطف الحمض النووي الجيني كما هو مطلوب في التعليمات ، على الأقللا اقل من 15μl.

Lنقاء آه of الحمض النووي الجينيمعزول

يمكن أن يؤدي انخفاض نقاء الحمض النووي الجيني إلى فشل أو نتائج غير مرضية للتجارب اللاحقة ، مثل: لا يمكن قطع الإنزيمات ، ولا يمكن لـ PCR الحصول على جزء الجين المطلوب ، إلخ.

الأسباب المحتملة هي كما يلي:

1. تلوث البروتينات المغايرة ، تلوث الحمض النووي الريبي.

التحليل: لم يتم غسل عمود التنقية باستخدام Buffer PW ؛لم يتم غسل عمود تنقية الغسيل Buffer PW باستخدام سرعة الطرد المركزي الصحيحة.

توصية: تأكد من عدم وجود ترسيب في المادة الطافية قبل إضافة الإيثانول ؛تأكد من غسل عمود التنقية حسب التعليمات ، ولا يمكن حذف هذه الخطوة.

2. التلوث الأيوني الشوائب.

التحليل: تم حذف عمود تنقية الغسيل المؤقت WB أو غسله مرة واحدة فقط ، مما أدى إلى تلوث أيوني متبقي.

توصية: تأكد من غسل Buffer WB مرتين حسب التوجيهات لإزالة الأيونات المتبقية قدر الإمكان.

3. التلوث بإنزيم الحمض النووي الريبي.

التحليل: تمت إضافة RNases الأجنبية إلى المخزن المؤقت ؛كانت عملية غسل Buffer PW غير صحيحة ، مما أدى إلى وجود بقايا RNase ، مما أثر على العمليات التجريبية لـ RNA المصب ، مثل النسخ في المختبر.

توصية: سلسلة الحمض النووي Foregeneايزولايمكن لمجموعات نشوئها إزالة الحمض النووي الريبي بدون إضافة إضافية لـ RNase ،هكذا طقم عزل DNA لبطاقة FTA / مسحة الشدقتحتاج"t إضافة RNase ؛تأكد من اتباع التعليمات الخاصة بعمود تنقية الغسيل Buffer PW ، ولا يمكن حذف هذه الخطوة.

4. بقايا الايثانول.

التحليل: لم يقم Buffer WB بإجراء الطرد المركزي للأنبوب الفارغ بعد غسل عمود التنقية.

توصية: قم بإجراء عملية الطرد المركزي للأنبوب الفارغ الصحيح وفقًا للتعليمات.

5. تلوث النجاسة الأخرى.

التحليل: العينات المحفوظة أو العينات الخاصة لا تتم معالجتها مسبقًا.

توصية: معالجة العينة تمامًا وفقًا للتعليمات.