الميزة البارزة لتفاعل PCR هي قدرتها الكبيرة على التضخيم وحساسيتها العالية للغاية.من أجل تحسين أداء PCR وكفاءة الكشف ، نحن ملتزمون بتحسين قدرة تضخيم PCR وحساسية الكشف ، ولكن الصداع في طور التجربة.غالبًا ما تحدث إيجابيات كاذبة ، وقد تتسبب كمية صغيرة جدًا من التلوث المتبادل في العينة أو تلوث منتج تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) في نتائج إيجابية خاطئة في التجربة.
خمسة أنواع من تلوث منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل
هناك العديد من الأسباب لتلوث تفاعل البوليميراز المتسلسل ، والتي يمكن تقسيمها تقريبًا إلى الفئات التالية:
ينتج تلوث العينة بشكل أساسي عن تلوث الحاوية الخاصة بجمع العينة ، أو عند وضع العينة ، يتم تسريبها من الحاوية بسبب السداد الفضفاض ، أو يتم لصق العينة على الجزء الخارجي من الحاوية ، مما يتسبب في حدوث تلوث متقاطع ؛يؤدي التلوث إلى تلوث بين العينات ؛يمكن لبعض العينات الميكروبية ، وخاصة الفيروسات ، أن تنتشر مع الهباء الجوي أو تشكل الهباء الجوي ، مما يؤدي إلى تلوث متبادل.
السبب الرئيسي هو أنه أثناء تحضير كواشف تفاعل البوليميراز المتسلسل ، تلوث مسدس العينة والحاوية والماء المقطر المزدوج والمحاليل الأخرى بواسطة قالب الحمض النووي PCR.
في مختبرات البيولوجيا الجزيئية وبعض المعامل التي تستخدم البلازميدات المستنسخة كعناصر تحكم إيجابية ، فإن مشكلة تلوث البلازميدات المستنسخة شائعة أيضًا.لأن محتوى استنساخ البلازميد في حجم الوحدة مرتفع للغاية ، وهناك حاجة إلى المزيد من الأدوات والكواشف في عملية التنقية ، ومن المحتمل جدًا أن يتلوث البلازميد في الخلايا الحية بسبب النمو القوي وقدرة التكاثر للخلايا الحية.
يعد تلوث المنتجات المكبرة مشكلة التلوث الأكثر شيوعًا في تفاعلات تفاعل البوليميراز المتسلسل.نظرًا لأن كمية نسخ منتج PCR كبيرة (بشكل عام 1013 نسخة / مل) ، وهي أعلى بكثير من حد رقم نسخة الكشف عن تفاعل البوليميراز المتسلسل ، فإن كمية صغيرة جدًا من تلوث منتج تفاعل البوليميراز المتسلسل يمكن أن تتسبب في نتائج إيجابية خاطئة.
يعد تلوث الهباء الجوي هو الشكل الأكثر احتمالا لتلوث منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل ، وهو أيضًا أسهل أشكال التلوث التي يمكن التغاضي عنها.يتكون من الاحتكاك بين سطح السائل والهواء.بشكل عام ، يمكن أن يتشكل تلوث الهباء الجوي عند فتح الغطاء ، أو عند شفط العينة ، أو حتى عندما يتم اهتزاز أنبوب التفاعل بقوة.وفقًا للحسابات ، يمكن أن تحتوي جسيمات الهباء الجوي على 48000 نسخة ، لذا فإن التلوث الناجم عنها يمثل مشكلة تستحق اهتمامًا خاصًا.
على وجه الخصوص ، غالبًا ما تستخدم مختبرات الاختبار نفس زوج من البادئات لاختبار جين معين.بمرور الوقت ، ستحدث كمية كبيرة من تلوث منتج PCR في مساحة المختبر.بمجرد حدوث مثل هذا التلوث ، من الصعب القضاء عليه في وقت قصير.
بالنسبة للأنواع الثلاثة الأولى من التلوث ، يمكننا استخدام وسائل فعالة لتجنبها ، ولكن من الصعب منع التلوث الناجم عن منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل ، خاصة في إنشاء مختبرات تفاعل البوليميراز المتسلسل غير القياسية.في عملية تفاعل البوليميراز المتسلسل ، عندما يمتص طرف الماصة وينفخ السائل ، ويتم فتح غطاء أنبوب PCR ، سيتم تشكيل الهباء الجوي.يصعب التخلص من جزيئات الحمض النووي التي يحملها الهباء الجوي (يمكن أن يحمل الهباء الجوي عشرات الآلاف من الحمض النووي) لأنها تطفو في الهواء.بمجرد تقديم الجولة التالية من تجارب تفاعل البوليميراز المتسلسل ، ستحدث حتماً إيجابيات خاطئة.
كما هو مبين في الشكل أدناه ، فإن التحكم السلبي أدى أيضًا إلى تضخيم نطاق الاهتمام المقابل:
يتم هنا تقديم الجزء الأول من قضية التلوث والوقاية من تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR).سيأتيك الإصدار التالي بالجزء الثاني "منع تلوث منتج تفاعل البوليميراز المتسلسل" ، فابق على اتصال!
الوقت ما بعد: 25 يوليو 2017
