فهم فورجين ومعرفته بـ DirectPCR

أولاً ، تقنية DirectPCR هي تقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) المباشرة لمختلف أنسجة العينات البيولوجية.في ظل هذه الحالة الفنية ، ليست هناك حاجة لفصل واستخراج الأحماض النووية ، ويتم استخدام عينة الأنسجة مباشرة ككائن ، ويتم إضافة بادئات الجين المستهدفة لتفاعل PCR.

ثانيًا ، تقنية DirectPCR ليست فقط تقنية تضخيم قالب DNA تقليدية ، ولكنها تتضمن أيضًا نسخًا عكسيًا لقالب الحمض النووي الريبي PCR.

ثالثًا ، لا تقوم تقنية DirectPCR بإجراء تفاعلات PCR نوعية روتينية مباشرة على عينات الأنسجة فحسب ، بل تشمل أيضًا تفاعلات qPCR في الوقت الفعلي ، والتي تتطلب أن يتمتع نظام التفاعل بقدرة قوية على مقاومة تداخل التألق في الخلفية واستعداء مخمدات الفلورة الداخلية.

رابعًا ، لا تتطلب عينات الأنسجة المستهدفة بواسطة تقنية DirectPCR سوى إطلاق قوالب الحمض النووي ولا تزيل البروتينات والسكريات المتعددة وأيونات الملح وما إلى ذلك التي تتداخل مع تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل.يتطلب ذلك أن يكون لبوليميراز الحمض النووي و PCR Mix في نظام التفاعل قابلية ممتازة للانعكاس والقدرة على التكيف ، ويمكن أن يضمن نشاط الإنزيم ودقة النسخ المتماثل في ظل الظروف المعقدة.

خامسًا ، لم تخضع عينات الأنسجة المستهدفة بواسطة تقنية DirectPCR لأي معالجة تخصيب الحمض النووي ، كما أن كمية القالب صغيرة جدًا ، مما يتطلب حساسية عالية للغاية وكفاءة تضخيم لنظام التفاعل.