1 ، استبدال اللوازم التجريبية في الوقت المناسب

قم بإعداد التحكم السلبي (NTC) وكرره عدة مرات.بمجرد اكتشاف وجود تلوث بمنتج تفاعل البوليميراز المتسلسل في المختبر ، استبدل جميع المستلزمات التجريبية في الوقت المناسب.مثل: إعادة تخفيف وتحضير البادئات ، وإعادة تعقيم طرف الماصة ، وأنبوب EP ، و ddH2O ، وما إلى ذلك ، واستبداله بماصة جديدة ، واستعارة مختبرات أخرى مؤقتًا لإجراء تجارب تفاعل البوليميراز المتسلسل.يجب تهوية المختبر الملوث وتشعيعه بالأشعة فوق البنفسجية حتى يتم التخلص من تلوث منتج تفاعل البوليميراز المتسلسل قبل الشروع في التجربة.

2 ، تمديد وقت التعرض للأشعة فوق البنفسجية

وتجدر الإشارة إلى أنه لإزالة تلوث الحمض النووي ، يجب تمديد الأشعة فوق البنفسجية العادية لمدة ساعتين عن المعتاد.ومع ذلك ، فإن تأثير الإشعاع فوق البنفسجي على إزالة الأجزاء الصغيرة (أقل من 200 نقطة أساس) من تلوث الحمض النووي لا يزال غير جيد.

يبلغ الطول الموجي فوق البنفسجي (نانومتر) بشكل عام 254/300 نانومتر ، ويكفي للإشعاع لمدة 30 دقيقة.وتجدر الإشارة إلى أنه عند اختيار الأشعة فوق البنفسجية للقضاء على تلوث نواتج تفاعل البوليميراز المتسلسل المتبقية ، ينبغي النظر في طول منتج تفاعل البوليميراز المتسلسل وتوزيع القواعد في تسلسل المنتج.يكون التشعيع بالأشعة فوق البنفسجية فعالاً فقط مع الأجزاء الطويلة التي تزيد عن 500 نقطة أساس ، وله تأثير ضئيل على الأجزاء القصيرة.

أثناء التشعيع بالأشعة فوق البنفسجية ، ستشكل قواعد البيريميدين في منتج PCR ثنائيات.يمكن لهذه الثنائيات أن تنهي الامتداد ، ولكن ليس كل البيريميدينات في سلسلة الحمض النووي يمكن أن تشكل ثنائيات ، كما يمكن للإشعاع فوق البنفسجي أن يكسر الثنائيات..تعتمد درجة تكوين الثنائيات على الطول الموجي للأشعة فوق البنفسجية ، ونوع ثنائي بيريميدين وتسلسل النيوكليوتيدات المجاورة لموقع الثنائى.لذلك ، إذا كانت الأجزاء المضخمة من تفاعل البوليميراز المتسلسل صغيرة ، فمن المستحسن استخدام نظام تلوث المنتج المضاد لتفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل (UNG).

3 ، كاسحات تلوث الحمض النووي المستخدمة بشكل شائع

تتولد الهباء الجوي بسهولة عند إضافة الماصات ، وهو أمر يصعب تجنبه ، وسوف يستقر بسرعة.لذلك ، فإنه بلا شك اختيار جيد لاستخدام أدوات إزالة التلوث الخاصة بالحمض النووي بشكل متكرر لمنع انتشار تلوث الحمض النووي.

4 ، استخدم نظام مكافحة التلوث UNG

بعد إزالة تلوث منتج تفاعل البوليميراز المتسلسل ، يمكن لمختبر الاختبار استخدام نظام تلوث المنتج المضاد لتفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل (UNG) لمنع تلوث منتج تفاعل البوليميراز المتسلسل.في المختبرات العامة ، يمكنك إجراء أقسام تجريبية بسيطة ، وفصل منطقة منتج تفاعل البوليميراز المتسلسل بشكل صارم عن المناطق الأخرى ، وإنشاء قواعد وأنظمة معملية معينة ، وإجراء تدريب ذي صلة لمنع حدوث تلوث بمنتج تفاعل البوليميراز المتسلسل.

التوصيات: إن إنشاء مختبر PCR معقول ، والحفاظ على بيئة PCR جيدة ، وصياغة إجراءات تشغيل PCR قياسية ، وتنمية الوعي التشغيلي الصارم لدى المجربين هي مفاتيح منع أو تقليل تلوث تجارب PCR.