إنشاء SOP لتجربة PCR لتوحيد سلوك أفراد التجربة.
يلتزم المجرب بصرامة بإجراءات التشغيل ، ويقلل من تلوث تفاعل البوليميراز المتسلسل الذي قد يكون ناتجًا عن عوامل بشرية أو يمنع حدوث التلوث.بالإضافة إلى ذلك ، يجب أن يكون لدى المجرب المعرفة والمهارات المهنية المقابلة ، بما في ذلك الكفاءة في تشغيل المعدات ذات الصلة ، وتوضيح عملية العمل بأكملها ، وإتقان طرق معالجة التلوث وطرق مراقبة جودة المختبر ، والقدرة على تفسير نتائج الاختبار بشكل صحيح.
إنشاء مختبر PCR قياسي.
ينقسم مختبر تفاعل البوليميراز المتسلسل إلى أربعة مجالات من حيث المبدأ ، وهي منطقة تحضير الكاشف ومنطقة معالجة العينات ومنطقة التضخيم ومنطقة تحليل منتج التضخيم.أول منطقتين هما مناطق التضخيم المسبق ، والمنطقتان الأخيرتان هما مناطق ما بعد التضخيم.يجب فصل منطقة التضخيم المسبق ومنطقة ما بعد التضخيم بدقة.يمكن أن تتدفق المواد التجريبية والكواشف وورق التسجيل والأقلام ومواد التنظيف وما إلى ذلك فقط من منطقة التضخيم المسبق إلى منطقة ما بعد التضخيم ، أي من منطقة تحضير الكاشف ← منطقة معالجة العينة ← منطقة التضخيم ← منطقة تحليل منتج التضخيم ، ويجب ألا تتدفق للخلف.يجب أن يتدفق تدفق الهواء في المختبر أيضًا من منطقة التضخيم المسبق إلى منطقة ما بعد التضخيم ، ولا يتدفق إلى الوراء.يظهر التصميم المثالي لمختبر PCR أدناه:
الشكل أ: وضع الإعداد المثالي لمختبر تفاعل البوليميراز المتسلسل مع الضغط السلبي في الغرفة العازلة
الشكل ب: وضع الإعداد المثالي لمختبر PCR مع الضغط الإيجابي في غرفة العازلة
يجب أن تكون المخططات التخطيطية لإعداد مختبر PCR الواردة في الشكل (أ) والشكل (ب) هي وضع الإعداد الأكثر مثالية ، ويمكن للمختبر ذي الظروف الرجوع إلى هذا الوضع للتصميم.بالنسبة للمختبرات العادية ، يوصى بفصل منطقة تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل ومنطقة تحليل المنتج ، ويجب تقليل فتح الغطاء قدر الإمكان في منطقة تحضير العينة ومنطقة تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل.تذكر: يُحظر تمامًا نقل المنتجات والمستلزمات التجريبية في منطقة تحليل المنتج إلى منطقة تحضير العينات ومنطقة تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل.
إذا كان المختبر يقوم فقط باكتشاف وتحديد تفاعل البوليميراز المتسلسل ، فمن المستحسن استخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي الفلوري بدلاً من تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي.
يمكن جمع نتائج الكشف الكمي عن تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وتحليلها بواسطة إشارات التألق ، لذلك ليست هناك حاجة لفتح الغطاء للرحلان الكهربي بعد التفاعل ، مما يتجنب تلوث منتج تفاعل البوليميراز المتسلسل الناتج عن تسرب منتجات التفاعل لتشكيل الهباء الجوي.إذا قمت بزيادة عدد فتحات الغطاء أثناء خطوة تحميل الرحلان الكهربائي للهلام ، فمن المحتمل أن يحدث تلوث بالهباء الجوي.يوصى بتعزيز تطبيق PCR الكمي واستبدال PCR النوعي تدريجيًا.
يتم استخدام نظام تلوث منتج UNG المضاد لتفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل لتفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل.
يستخدم النظام dUTP بدلاً من dTTP.بعد تفاعل PCR ، يتم دمج جميع منتجات PCR (أجزاء DNA) مع dUTP ؛في الجولة التالية من تفاعل PCR ، يتم تحضين إنزيم UNG المضاف إلى النظام عند 37 درجة مئوية لمدة 5 دقائق قبل تفاعل البوليميراز المتسلسل ، والذي يمكن أن يتحلل على وجه التحديد جميع أجزاء الحمض النووي التي تحتوي على dUTP ، ثم إجراء تفاعل PCR.هذا يمكن أن يزيل تمامًا تلوث الهباء الجوي الناجم عن منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل.يظهر التأثير في الشكل أدناه:
ملاحظة: بالنسبة لسلسلة PCR المباشرة ، يمكنك اختيار سلسلة منتجات نظام تلوث المنتج المضاد لـ PCR لشركة Foregeneيقترح
بالنسبة للمختبرات التي تجري اختبارات التنميط الجيني على نطاق واسع ، يوصى بشدة باستخدام نظام تلوث منتجات UNG المضاد لتفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل لاختبار الكواشف بالإضافة إلى إنشاء مختبرات معقولة.
تذكير: لا يمكن أن يؤدي استخدام هذا النظام إلى إزالة تلوث منتج تفاعل البوليميراز المتسلسل الذي تم بالفعل.لذلك ، يجب استخدام نظام UNG في بداية الاختبار ذي الصلة ، ويجب استخدام نظام UNG لتضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل ، وذلك لمنع تلوث منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل الكاذب.
يوصى باستخدام نظام Direct PCR-UNG الخاص بشركة Foregene عند إجراء اختبارات على نطاق واسع ، مثل:
مجموعة PCR المباشرة لأوراق النبات- UNG
مجموعة PCR المباشرة للبذور النباتية
مجموعة PCR المباشرة لأنسجة الحيوانات
Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG
هذه السلسلة من المجموعات من Foregeneلا يمكن فقط إجراء الكشف عن تفاعل البوليميراز المتسلسل بسرعة وعلى نطاق واسع ، ولكن أيضًا منع تلوث منتج تفاعل البوليميراز المتسلسل والسيطرة عليه بشكل فعال.
الوقت ما بعد: 19 مارس - 2021
