بناء SOP Systerm

إنشاء SOP لتجربة PCR لتوحيد سلوك أفراد التجربة.

يلتزم المجربون بصرامة بإجراءات التشغيل ، ويقللون من تلوث تفاعل البوليميراز المتسلسل الذي قد تسببه العوامل البشرية أو يمنع حدوث التلوث في العملية.بالإضافة إلى ذلك ، يجب أن يكون لدى المجرب المعرفة والمهارات المهنية المقابلة ، بما في ذلك الكفاءة في تشغيل المعدات ذات الصلة ، وتوضيح عملية العمل بأكملها ، وإتقان طرق معالجة التلوث وطرق مراقبة جودة المختبر ، والقدرة على تفسير نتائج الاختبار بشكل صحيح.

بناء مختبر PCR القياسي

ينقسم مختبر تفاعل البوليميراز المتسلسل إلى أربعة مجالات من حيث المبدأ ، وهي منطقة تحضير الكاشف ومنطقة معالجة العينة ومنطقة التضخيم ومنطقة تحليل منتج التضخيم.أول منطقتين هما مناطق التضخيم المسبق ، والمنطقتان الأخيرتان هما مناطق ما بعد التضخيم.يجب فصل منطقة التضخيم المسبق ومنطقة ما بعد التضخيم بدقة.يمكن أن تتدفق المواد التجريبية والكواشف وورق التسجيل والأقلام ومواد التنظيف وما إلى ذلك فقط من منطقة التضخيم المسبق إلى منطقة ما بعد التضخيم ، أي من منطقة تحضير الكاشف ومنطقة معالجة العينة ومنطقة التضخيم ومنطقة تحليل منتج التضخيم ، ويجب ألا تتدفق في الاتجاه العكسي.يجب أن يتدفق تدفق الهواء في المختبر أيضًا من منطقة التضخيم المسبق إلى منطقة ما بعد التضخيم ، وليس في الاتجاه العكسي.

تقليل الخطوات التجريبية

إذا كان المختبر يقوم فقط باكتشاف وتحديد تفاعل البوليميراز المتسلسل ، فمن المستحسن استخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي الفلوري بدلاً من تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي.

يمكن جمع نتائج الكشف الكمي عن تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وتحليلها بواسطة إشارات الفلورسنت ، لذلك ليست هناك حاجة لفتح الغطاء للرحلان الكهربي بعد التفاعل ، مما يجنب تلوث منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل الناتج عن تسرب منتجات التفاعل لتشكيل الهباء الجوي.إذا قمت بزيادة عدد فتحات الغطاء أثناء خطوة تحميل الرحلان الكهربائي للهلام ، فمن المحتمل أن يحدث تلوث بالهباء الجوي.يوصى بتعزيز تطبيق PCR الكمي واستبدال PCR النوعي تدريجيًا.

اعتماد نظام مكافحة التلوث UNG

يتم استخدام نظام تلوث منتج UNG المضاد لتفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل لتفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل.

يستخدم النظام dUTP بدلاً من dTTP.بعد تفاعل PCR ، يتم دمج جميع منتجات PCR (أجزاء DNA) مع dUTP ؛في الجولة التالية من تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل ، يتم تحضين إنزيم UNG المضاف إلى النظام عند 37 درجة مئوية لمدة 5 دقائق قبل تفاعل البوليميراز المتسلسل ، والذي يمكن أن يؤدي إلى تحطيم جميع أجزاء الحمض النووي التي تحتوي على dUTP ، ثم إجراء تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل.هذا يمكن أن يزيل تمامًا تلوث الهباء الجوي الناجم عن منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل.يظهر التأثير في الشكل أدناه:

ملاحظة: بالنسبة لسلسلة PCR المباشرة ، يمكنك اختيار سلسلة منتجات نظام تلوث المنتج المضاد لـ PCR لشركة FJ Biotech

يقترح

بالنسبة للمختبرات التي تجري اختبارات التنميط الجيني على نطاق واسع ، يوصى بشدة باستخدام نظام تلوث منتجات UNG المضاد لتفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل لاختبار الكواشف بالإضافة إلى إنشاء مختبرات معقولة.

تذكير: لا يمكن أن يؤدي استخدام هذا النظام إلى إزالة تلوث منتج تفاعل البوليميراز المتسلسل الذي تم بالفعل.لذلك ، يجب استخدام نظام UNG في بداية الاختبار ذي الصلة ، ويجب دائمًا استخدام نظام UNG لتضخيم PCR ، وذلك لمنع تلوث منتجات PCR.إيجابية كاذبة.

يوصى باستخدام نظام Direct PCR-UNG الخاص بـ Forge Biotech عند إجراء اختبارات على نطاق واسع ، مثل: Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG

مجموعة PCR المباشرة للبذور النباتية

مجموعة PCR المباشرة لأنسجة الحيوانات

Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG

Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG

هذه السلسلة من المجموعات من Foregene لا يمكنها فقط إجراء الكشف عن تفاعل البوليميراز المتسلسل بسرعة وعلى نطاق واسع ، ولكن أيضًا تمنع تلوث منتج تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) والتحكم فيه بشكل فعال.