كم تعرف

حول ناستخراج حمض اليوكليك

بداية ونهاية الحمض النووي المنقى

كل شيء صعب في البداية ، الحمض النووي المنقى هو الأكثر

بدء التجارب الجزيئية للتجارب اللاحقة

النجاح أو الفشل له تأثير حاسم.

يفضل العديد من الباحثين العلميين مقياس الطيف الضوئي للأشعة فوق البنفسجية التتبع / التتبع الفائق لأنه يمكن أن يكتشف تركيز الحمض النووي وبقايا أيونات الملح والبروتينات ببساطة وسرعة واقتصاد.

كما نعلم جميعًا ، A260 تعني قيمة OD لامتصاص الحمض النووي ، A280 تعني قيمة OD لامتصاص تركيز البروتين ، A230 تعني قيمة OD لامتصاص تركيز أيون الملح ، لذا يمكن لـ A260 تحويل تركيز الحمض النووي ، A260 / 280 تعني بقايا البروتين ، A260 / 230 تعني بقايا أيون الملح ، ولكن هذه مجرد قاعدة اكتشفها الباحثون بناءً على عدد كبير من نتائج القياس ، وهي "عادي"للاعتقاد بأنه يمكن أن يفسر نقاء DNA و RNA لإلى حد ما.إنه ليس المعيار الوحيد لتحديد إنتاجية الحمض النووي ونقاوته ، فهو يستخدم فقط كمرجع ، وليس "معيارًا ذهبيًا".

يؤكد دليل Thermo Fisher ND-2000 على موثوقية نتائج الاختبار

والسبب هو أن النتائج التي تم الحصول عليها باستخدام مقياس الطيف الضوئي الصغير / الفائق الصغر للأشعة فوق البنفسجية تعكس فقط إنتاجية ونقاء الحمض النووي من الجانب ، وهناك العديد من العوامل المؤثرة (المسار البصري ، حجم العينة ، تركيز العينة ، قيمة الأس الهيدروجيني ، الأيونات الأخرى التي تؤثر على قياس الامتصاص ، إلخ) ، قيمة OD المقاسة ليست دقيقة بالضرورة.في الوقت نفسه ، نظرًا لعدم وجود خصوصية لمواد تحديد قيمة الامتصاص ، فإن الحمض النووي أحادي الجديلة ، والحمض النووي المزدوج الشريطة ، و RNA ، و dNTPs ، وبعض البروتينات جميعها لها قمم امتصاص بطول موجة 260 نانومتر ، والتركيز الذي يحدده A260 وحده ليس بالضرورة الحمض النووي الحقيقي أو الحمض النووي الريبي.لا يمكن الحكم على التركيز وسلامته وتدهوره.

فكيف نحكم على جودة الحمض النووي المنقى لدينا؟بالإضافة إلى استخدام مقياس طيف ضوئي دقيق / فائق الصغر للأشعة فوق البنفسجية للكشف ، فإن طرق مثل الرحلان الكهربائي لهلام الاغاروز مطلوبة أيضًا لعرض نقاء وسلامة الحمض النووي بصريًا ، ولإشارة التركيز إلى حد معين.وبهذه الطريقة ، يكون إنتاج الحمض النووي والنقاء الذي تم الحصول عليه من نتائج الكشف عن الطرق المختلفة موثوقًا به.

مقارنة المخططات التجريبية

تم استخراج الحمض النووي الجينومي لخلايا H1299 باستخدام مجموعات استخراج الحمض النووي للشركة A ، وشوهد تلوثًا كبيرًا بالشوائب ، مما أدى إلى قيم OD عالية

(قيمة قياس OD والمخطط الكهربائي المقابل)

مؤشر التقييم

هل هناك "معيار ذهبي" لإنتاج الحمض النووي واختبار الجودة؟

بقدر ما نعلم ، لا توجد طريقة بسيطة وسريعة ورخيصة.سواء كان مقياس الطيف الضوئي ، أو الرحلان الكهربائي للهلام ، أو قياس الطيف الكتلي ، فإنها تعكس جميعها تركيز ونقاء الحمض النووي في المحلول من جوانب مختلفة ، ويجب الحكم عليها من خلال الإشارة إلى بعضها البعض.

أفضل مؤشر تقييم هو دائمامتابعة التطبيق التجريبي.لا يؤثر على كفاءة النسخ العكسي وتضخيم PCR.الحصول على منتجات تضخيم موثوقة وقيم Ct ، والحصول على تسلسل كامل بالتسلسل هو استخراج الحمض النووي الناجح.

خلاصة القول ، يجب تحدي وجهة نظر نظرية النسبة فقط من خلال وجهة نظر "استخدام نتائج تجريبية جيدة كمعايير استخلاص جيدة"!

الموصى بها مجموعات استخراج الحمض النووي الريبي Foregene للحصول على درجة نقاء عالية من الحمض النووي / الحمض النووي الريبي:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/