يبدأ الاختبار المعملي بجمع العينات ، ويكون جمع العينات أسهل من حيث التغاضي عنه.أهم شيء في جمع العينات هو اختيار نوع العينة الصحيح ، واستخدام أدوات أخذ العينات المناسبة ، وإجراء عمليات النقل والمعالجة المعقولة.

نوع العينة

أنواع العينات الشائعة هي كما يلي:

يمكن أن تشير طريقة أخذ العينات إلى المواصفات الفنية للرصد البيئي لفيروس كورونا الجديد في سوق التجارة الزراعية (البازار) ":

1. عينات مسحة من مسحات الحلق واليدين والملابس والأشياء الأخرى للممارسين: يلزم استخدام محلول الوقاية من الفيروس في أنبوب أخذ عينات الفيروس والتسلل الكامل إلى المسحات القطنية لأخذ العينات.سطح الأرض) يتم دهنه وشطفه بشكل متكرر لأكثر من 3 مرات.في الوقت نفسه ، من الضروري إجراء أخذ عينات موزعة متعددة النقاط على سطح الكائن الذي تم اختباره.

2. عينات مسحة سطح الغذاء: لا يمكن جمع عينات الطعام مباشرة.يجب فصل الطعام المراد جمعه بعناية وتخزينه في كيس أخذ عينات نظيف قبل جمع عينات المسحة.يلزم استخدام محلول الحفاظ على الفيروس في أنبوب أخذ عينات الفيروس ، بعد نقع مسحة القطن لأخذ العينات بالكامل ، لتشويه وشطف سطح عينة الطعام بشكل متكرر ليتم جمعها أكثر من 3 مرات.في الوقت نفسه ، من الضروري إجراء أخذ عينات موزعة متعددة النقاط على سطح العينة.

3. عينات مياه الصرف الصحي: وفقًا لتوزيع نظام الصرف الصحي في السوق ، حدد 2-3 مواقع لأخذ عينات مياه الصرف الصحي ، مع التركيز على مجموعة شبكة الأنابيب الداخلية ، أو اتجاه تدفق المياه ، أو الاتصال بشبكة الأنابيب البلدية.لجمع عينة المسحة ، قم بغمرها في مياه الصرف الصحي باستخدام مسحة قطنية لأخذ العينات لجعلها تمتص مياه الصرف الصحي وتشطفها في أنبوب أخذ العينات أكثر من 3 مرات.لجمع عينات مياه الصرف الصحي ، استخدم قوارير بلاستيكية من البولي إيثيلين لجمع عينات من مياه الصرف الصحي من 30 إلى 500 مل ؛لتجميع مياه الصرف الصحي بحجم أكبر من 500 مل ، يمكن استخدام دلاء بلاستيكية من البولي إيثيلين أو معدات تخصيب خاصة لعينة المياه في الموقع.في الوقت نفسه ، من الضروري إجراء أخذ عينات موزعة متعددة النقاط لموقع أخذ عينات مياه الصرف الصحي.

4. عينات الحيوانات: بالنسبة للحيوانات الحية ، يمكن استخدام مسحات أخذ العينات لجمع مسحات سطح الجسم ، ومسحات البلعوم الفموي ومسحات الشرج ، ويمكن أيضًا جمع عينات البراز أو الإفرازات وتسجيلها وفقًا لذلك في ورقة التسجيل.بالنسبة لعينات الحيوانات التي خضعت للسلخ ، وما إلى ذلك ، استخدم مسحات قطنية لجمع عينات من سطح الجسم وعينات تجويف الجسم.يلزم استخدام محلول الحفاظ على الفيروس في أنبوب أخذ عينات الفيروس للتسلل بشكل كامل إلى مسحة القطن لأخذ العينات ، ثم إعادة تطبيق سطح عينة الطعام المراد جمعها.شابو أكثر من 3 مرات.في الوقت نفسه ، من الضروري إجراء أخذ عينات موزعة متعددة النقاط على سطح العينة.

5. أجهزة أخرى: حاويات لنقل وتربية الحيوانات مثل الأقفاص أو خزانات الأسماك.أولاً ، لاحظ أو افهم الأنواع المحددة من الحيوانات المخزنة والمرباة في الحاوية ، وجمع عينات المسحة على الجدار الداخلي للحاوية أو عينات سائلة من المحتويات.

6- اجمع عينات الهباء الجوي في المناطق التي يتجمع فيها الناس ، والمناطق التجارية المحلية سيئة التهوية ، والمكاتب ، وغرف الاستراحة.

II أدوات أخذ العينات
1. أنبوب جمع الدم
إذا كنت بحاجة إلى إجراء اختبار الحمض النووي وعينات مضادات التخثر في وقت لاحق ، فمن المستحسن استخدام وعاء دموي مفرغ يحتوي على مادة EDTA المضادة للتخثر لجمع الدم ؛بالنسبة لعينات المصل ، يوصى باستخدام وعاء دموي مفرغ بدون مضاد للتخثر.

2. مسحة أخذ العينات

يوصى باستخدام مسحات البولي بروبلين بدلاً من مسحات ألجينات الكالسيوم أو المسحات ذات الأعمدة الخشبية ، لأنها قد تحتوي على مواد تعمل على تعطيل بعض الفيروسات وتمنع اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل.لا يمكن استخدام المسحات ذات الرؤوس القطنية ، لأن الألياف القطنية لها امتصاص قوي للبروتين ولا يمكن استخلاصها بسهولة في محلول الحفظ اللاحق.

في "المواصفات الفنية للجمع المختلط 10 في 1 واكتشاف الأحماض النووية لفيروس كورونا الجديد" ، تم النص بوضوح على أن "مسحة أخذ العينات يجب أن تكون مصنوعة من البوليستر والنايلون وغيرها من المواد غير القطنية وغير الكالسيوم ، ويجب أن يكون المقبض مصنوعًا من مادة غير خشبية.تقع نقطة الكسر على بعد حوالي 3 سم من أعلى رأس الماسحة ، وهو سهل الكسر. "

ذكر مركز السيطرة على الأمراض في الولايات المتحدة أيضًا "استخدم فقط مسحات الألياف الاصطناعية مع أعمدة بلاستيكية أو سلكية.لا تستخدم مسحات أو مسحات ألجينات الكالسيوم ذات الأعمدة الخشبية ،لأنها قد تحتوي على مواد تثبط بعض الفيروسات وتمنع اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل.

تستخدم حاليًا على نطاق واسع مسحة من النايلون المعقم القابل للتصرف مع قضيب بلاستيكي.تتميز مسحة التدفق بامتصاص أفضل للماء ومعدل إطلاق.وفقًا لمواقع أخذ العينات المختلفة ، فإن رأس المسحة أيضًا لها أحجام وألياف مختلفة.السماكة."

3. عينة من محلول حفظ النقل

محلول الحفاظ على تثبيط الفيروسات: يمكن للكمية المناسبة من تركيز ملح الجوانيدين ومجموعة متنوعة من مكونات تحلل الفيروس أن تحلل الفيروس مباشرة لإطلاق الحمض النووي ، وإلغاء تنشيط RNase و DNase ، وضمان سلامة الحمض النووي ، والذي يمكن استخدامه للكشف اللاحق عن qPCR.لا يمكن استخدامه لزراعة الفيروس وعزله.

محلول نقل الفيروسات والحفاظ عليها: يحتوي على الأملاح والأحماض الأمينية والفيتامينات والجلوكوز والبروتينات اللازمة لبقاء الفيروس ، والتي يمكن أن تحافظ على نشاط الفيروس.يمكن استخدامه لاستخراج الحمض النووي والكشف عن الفيروس في المستقبل ، كما يمكن استخدامه لزراعة الفيروس وفصله.

4. أنبوب حفظ العينة وحقيبة العينة

يجب أن يكون أنبوب تخزين العينة عبارة عن أنبوب بلاستيكي معقم بغطاء لولبي لا يمتص الحمض النووي.يجب تغطية كل أنبوب عينة بكيس عينة لمنع تسرب وتلوث العينة.

ثالثا.المواد المتداخلة في العينة

المواد المتداخلة في تجارب PCR

1. متداخل داخلي

يمكن أن تتداخل المواد الموجودة في عينة الجسم مع اكتشاف المواد الأخرى.

دم:الهيم (> 1 مجم / مل) ، الهيمين (> 0.1 نانوغرام / ميكرولتر) ، الدهون الثلاثية ، IgG ، إلخ ؛

البول:اليوريا (20 ملم) ؛

براز:السكريات النباتية ، الكوليت.

منديل:البروتياز والكولاجين.

لبن: الأنزيم البروتيني ، أيون الكالسيوم.

المخدرات: المضادات الحيوية ، الأدوية المضادة للفيروسات ، الهرمونات ، إلخ.

آخر.

2. متداخل خارجي

إنه يأتي من مواد يمكن أن تتداخل مع اكتشاف المواد الأخرى في المختبر.مضافات العينات والمواد التي يمكن الاتصال بها أثناء جمع العينات ومعالجتها:

مستلزمات الاختبار: هلام فصل المصل ، حاوية جمع العينات وسدادة مطاطية ، قسطرة ، سائل تنظيف القسطرة ، مسحوق القفازات ، إلخ.

مضاد تخثر: الهيبارين (> 0.1 U / مل) ، EDTA (> 0.5 مم) ، إلخ ؛

مادة متفاعلة: الأيزوبروبانول (> 0.1 وحدة دولية / مل) ، البيتين ، ثنائي ميثيل سلفوكسيد ، فورماميد ، الجلسرين ، ربط ، إلخ ؛

المطهرات: الكحولات (الإيثانول> 1٪) ، الألدهيدات ، الفينولات (الفينول> 0.2٪) ، البيروكسيدات ، الأحماض القوية (HCL) ، القلويات القوية (NaOH) ، إلخ ؛

منظف:SDS (> 0.005٪) ؛

تربة: دبال

صبغ: نيلي

آخر.

في ظل ظروف أخذ العينات الخارجية الفعلية ، مثل جمع العينات البيئية ، قد تحتوي العينات على مجموعة متنوعة من المواد المتداخلة ، ويختلف تكوين المواد المتداخلة في كل موقع ، مما يتطلب إجراء تجارب تداخل PCR وفقًا للظروف المحلية.

رابعا.عينة التخزين وظروف النقل

يجب إرسال العينات السريرية التي تم جمعها حديثًا إلى المختبر في غضون 2 إلى 4 ساعات بعد جمعها عند 2 درجة مئوية إلى 8 درجات مئوية.تخزين في 4 ℃ في غضون 24 ساعة.يجب اختبار العينات المستخدمة في عزل الفيروس وكشف الحمض النووي في أسرع وقت ممكن.يمكن تخزين العينات التي يمكن اختبارها في غضون 24 ساعة عند 4 درجات مئوية ؛يجب تخزين العينات التي لا يمكن اكتشافها في غضون 24 ساعة عند -70 درجة مئوية أو أقل (إذا لم يكن كذلك - تخزينها عند 70 درجة مئوية في الثلاجة عند -20 درجة مئوية).

ملخص:يعتبر الجمع المعياري للعينات ونقلها وتخزينها أمرًا ضروريًا للاختبار اللاحق.تنتج السلبيات الخاطئة للعديد من الاختبارات المعملية عن جمع ونقل وتخزين غير صحيح للعينات التي تؤدي إلى تدهور الحمض النووي الفيروسي.ومع ذلك ، لا تزال العديد من المختبرات تتجاهل أهمية أخذ العينات.آمل أن تتمكن هذه المقالة من إيقاظ انتباه الجميع لأخذ العينات وإجراء المزيد من العينات العلمية والمعقولة!

المنتجات ذات الصلة:

مجموعة أدوات الكشف عن الأحماض النووية المتغيرة SARS-CoV-2 (I) (طريقة المسبار الفلوري متعدد الإرسال PCR) - للكشف عن المسوخ من البرازيل وجنوب إفريقيا والمملكة المتحدة