نصائح لتحسين استعادة الغراء

1. زيادة حمل العينة أثناء الرحلان الكهربائي.

2. استخدام العازلة الطازجة الكهربائي.

3. عند قطع الصمغ ، حاول قطع الغراء بشرائط فقط لتقليل حجم قطع الغراء: لا تحتاج إلى غراء مع شظايا قليلة الغرض ، وإلا فإنه سيؤثر على معدل الاسترداد.

4. بعد إذابة قطعتين أو أكثر من الغراء ، استخدم أنبوبًا مهما كان حجمه وانقله إلى نفس العمود.

5. يمكن أن يكون المحلول المضاف في sol أكثر بقليل ، وهو أكثر ملاءمة لربط الحمض النووي بالغشاء ، ولكن بشكل عام لا يتجاوز 750ul.

6. إن مفتاح استعادة الهلام هو ربط الحمض النووي بالعمود من خلال تركيز الملح والحموضة (الشحنة) والكراهية للماء للمحلول في العمود.لذلك ، إذا كان الرقم الهيدروجيني للعازل الكهربائي مرتفعًا جدًا ، فيمكن إضافة 10ul (pH 5.0 ، 3mol / L NaAC) إلى sol ؛من أجل اعتراض جزيئات الحمض النووي على الغشاء بشكل أفضل ، يمكن إضافة 30 ٪ من الأيزوبروبانول للتسخين في السائل بعد إذابة الصمغ.

7. قبل إضافة شطف ، اترك العمود في درجة حرارة الغرفة لبضع دقائق (حوالي 10 دقائق) حتى يتبخر الإيثانول تمامًا.

8. أخيرًا ، أضف القليل من الوضوح لتقليل حجم الاسترداد.بشكل عام ، يتم استخدام 30-50 مايكرولتر من شطف الشطف (ليس قليلًا جدًا ، وإلا فلن يكون قادرًا على تبليل الغشاء ، وهو ما لا يؤدي إلى الشطف) ؛توجد قطرات الشطف في وسط الغشاء ، لتصفية الحمض النووي المرتبط بالغشاء بالكامل.

9. بعد إضافة eluent ، يمكن تصفيته في حمام مائي بدرجة حرارة 55 درجة لمدة 5 دقائق أو وضعه في حمام مائي بدرجة حرارة 50 درجة لأكثر من 10 دقائق ، أو ختمه ببارافيلم عند 4 درجات طوال الليل ، ثم طرده بالطرد المركزي للتعافي في اليوم التالي ، يكون التأثير جيدًا.

10 قم بإضافة شطف الطرد المركزي إلى عمود الامتزاز وجهاز الطرد المركزي مرة أخرى.

طرق وإجراءات مفصلة لاستعادة منتج PCR

1. إعادة تدوير المطاط العادي

إذا كنت ترغب في استعادة الغراء ، فمن الأفضل استخدام مجموعة مناسبة ولها معدل استرداد أعلى قليلاً.إذا كنت حقًا بحاجة إلى استعادته يدويًا ، يمكنك إضافة 3 أضعاف حجم TE بعد قطع الصمغ.بعد الذوبان في حمام مائي ، يتم استخراج الفينول والفينول / الكلوروفورم بشكل نظيف ، ويتم ترسيب الإيثانول.هذا كل شيء.

2. استعادة الحمض النووي من المواد الهلامية ذات درجة الانصهار المنخفضة

تنقية شظايا الحمض النووي أضف TE (10 مللي مول / لتر Tris-HCl pH8.0 ، 0.1 مللي مول / لتر EDTA) يساوي حجم الجل ، وضعه في حمام مائي 65 درجة مئوية لمدة 5 دقائق لإذابة الجل تمامًا.

بعد إحضاره إلى درجة حرارة الغرفة ، تمت إضافة كمية متساوية من الفينول (مشبع بـ TE ، تم ختم TE في الطبقة العليا ، وتمت إزالة الطبقة السفلية من الفينول) ، وتم خلط الخليط برفق (لا يتطلب الخلط) ، وطرده عند 12000 دورة في الدقيقة لمدة 3 دقائق.كرر 1-2 مرات.

خذ المادة الطافية ، أضف 0.1 حجم 3 مول / لتر أسيتات الصوديوم (الرقم الهيدروجيني 5.2) وحجم 2.5 مرة من الإيثانول المطلق لتنفيذ ترسيب الإيثانول.قم بإذابة الحمض النووي المنقى بكمية مناسبة من TE ، وقياس المحتوى ، والاستعداد للاستخدام (يمكن استخدامه لتحليل بنية الجينات المستهدفة ، وإعداد المسبار ، وما إلى ذلك).

3. استعادة تفاعل البوليميراز المتسلسل مع خصوصية تضخيم جيدة

إذا كانت خصوصية تضخيم PCR جيدة ، فهي مجرد تنقية واستعادة لمنتج PCR.يمكنك إضافة 50 ميكروغرام / مل من بروتيناز K إلى منتج PCR ، و 37 درجة لمدة ساعة واحدة ، واستخراجها مرة واحدة باستخدام الفينول / الكلوروفورم ، واستخراجها مرة واحدة باستخدام الكلوروفورم ، وإضافة 0.1 حجم من المادة الطافية.تمت استعادة أسيتات الصوديوم عن طريق الترسيب مع 2.5 حجم من الإيثانول المطلق.

منتجات ذات صله:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/