عادة ما تكون النسبة المنخفضة لـ A260 / A230 ناتجة عن الشوائب مع أقصى طول موجي للامتصاص عند 230 نانومتر.دعونا نرى ما تشمل هذه الشوائب:

• الملوثات الشائعة	الطول الموجي للامتصاص	تأثير النسبة
  بروتين	~ 230 نانومتر و 280 نانومتر	التخفيض المتزامن لـ A260/A 280و أ260/A 280النسب
  ملح الجوانيدين	220-240 نانومتر	قلل من A260/A 280نسبة
  الفينول	~ 270 نانومتر	-
  تريزول	~ 230 نانومتر و 270 نانومتر	قلل من A260/A 280نسبة
  EDTA	~ 230 نانومتر	قلل من A260/A 280نسبة
  الإيثانول	230-240 نانومتر	قلل من A260/A 280نسبة

 
 
 
الطول الموجي للامتصاص وقيمة التباين للملوثات الشائعة

Pتلوث البروتين
يمكن اعتبار تلوث البروتين هو التلوث الأكثر شيوعًا في عملية استخراج الحمض النووي.يوجد البروتين بين الطور المائي العلوي والسفليعضويمرحلة .سيقلل التلوث نسبة A260 / A280 و A260 / A230 في نفس الوقت ، وسوف تتغير نسبة A260 / A230 بشكل أوضح من نسبة A260 / A280.
خلال فترة لاحقةالنسخ العكسيor ردود فعل qPCR, يمكن لبقايا البروتين أن تمنع أو تتداخل مع وظيفة الإنزيم.أفضل طريقة لتجنب تلوث البروتين هي أن تضع في اعتبارك مبدأ "أقل من أكثر ، كمية صغيرة عدة مرات" عند استنشاق المادة الطافية.

2. تلوث الجوانيدينيوم
هيدروكلوريد (GuHCl) وثيوسيانات الغوانيدين (GTC) لهما تأثير تغيير طبيعة البروتينات ، والتي يمكن أن تدمر أغشية الخلايا بسرعة أثناء عملية استخراج الحمض النووي ، مما يتسبب في تمسخ البروتين وهطول الأمطار.يتراوح الطول الموجي لامتصاص GuHCl و GTC بين 220-240 نانومتر ، وسيقلل ملح الجوانيدينيوم المتبقي من نسبة A260 / A230.على الرغم من أن ملح الجوانيدينيوم المتبقي سيقلل من النسبة ،التأثير على تجارب المصب ضئيل في الواقع.

3. تلوث Trizol
المكون الرئيسي لتريزول هو الفينول.تتمثل الوظيفة الرئيسية للفينول في تحليل الخلايا وإطلاق البروتينات ومواد الأحماض النووية في الخلايا.على الرغم من أن الفينول يمكن أن يفسد البروتينات بشكل فعال ، إلا أنه لا يمكن أن يثبط نشاط RNase تمامًا.لذلك ، يتم إضافة 8-هيدروكسي كينولين ، غوانيدين أيزوثيوسيانات ، β- مركابتويثانول ، إلخ إلى TRIzol لتثبيط RNase الداخلي والخارجي.
عند استخراج الحمض النووي الريبي الخلوي ، يمكن أن يقوم Trizol بتحليل الخلايا بسرعة وتثبيط نوكلياز المنطلق من الخلايا ، وسيقلل Trizol المتبقي بشكل كبير من نسبة A260 / A230.
طريقة المعالجة: عند الطرد المركزي ، يجب ملاحظة أن الفينول الموجود في Trizol قابل للذوبان بسهولة في مرحلة الماء بشرط 4 درجات ودرجة حرارة الغرفة.

4. بقايا الايثانول
يستخدم الإيثانول في العملية النهائية لترسيب الحمض النووي أثناء إذابة أيونات الملح التي قد تكون مرتبطة بالحمض النووي.طول موجة الامتصاص الأعلىذروة امتصاصالإيثانول هو أيضا في 230-240 نانومتر ، وهوسيقلل أيضًا من نسبة A260 / A230.
يمكن تكرار طريقة تجنب بقايا الإيثانول مرتين أثناء الشطف النهائي ، والنفخ فيغطاء الدخانلمدة دقيقتين للسماح للإيثانول بالتبخر تمامًا قبل إضافة المخزن المؤقت للشطف.
ومع ذلك ، يجب أن نعرف أن النسبة ليست سوى مؤشر تقييم لجودة الحمض النووي الريبي.إذا تم تنظيم العمليات المذكورة أعلاه بشكل صارم ، فلن يكون للانحراف بين النسبة والنطاق القياسي تأثير كبير على تجارب المصب.
منتجات ذات صله:
طقم عزل الحمض النووي الريبي الحيواني
طقم عزل الحمض النووي الريبي الكلي للنبات
طقم عزل إجمالي الحمض النووي الريبي للخلايا
طقم عزل الحمض النووي الريبي الكلي للنباتات زائد