مجموعة عزل الحمض النووي الريبي الكلي للنبات بالإضافة إلى مجموعة Purificaiton للحمض النووي الريبي للنباتات الغنية بالسكريات والبوليفينول
وصف المجموعة:
القط رقم RE-05021/05022/05024
لتنقية إجمالي الحمض النووي الريبي من عينات النباتات العامة التي تحتوي على مكونات عالية السكاريد والبوليفينول.
استخراج الحمض النووي الريبي الكلي عالي الجودة من عينات النباتات التي تحتوي على نسبة عالية من السكريات والبوليفينول بسرعة.
RNase خالية باستخدام عمود تنظيف الحمض النووي
بسيطة — كل العمليات تتم في درجة حرارة الغرفة
سريع - يمكن إتمام العملية في 30 دقيقة
آمن - لا يستخدم كاشف عضوي 
تحديد
50 الإعدادية ، 200 الإعدادية
تستخدم المجموعة عمود الدوران والصيغة التي طورتها شركة Foregene ، والتي يمكنها استخراج الحمض النووي الريبي الكلي عالي النقاء وعالي الجودة من أنسجة نباتية مختلفة تحتوي على نسبة عالية من السكريات أو البوليفينول.إنه يوفر عمود تنظيف الحمض النووي الذي يمكنه بسهولة إزالة الحمض النووي الجيني من المادة الطافية ومحللة الأنسجة.يمكن لعمود الحمض النووي الريبي فقط ربط الحمض النووي الريبي بشكل فعال.يمكن للمجموعة معالجة عدد كبير من العينات في نفس الوقت.
لا يحتوي النظام بأكمله على RNase ، لذلك لن يتحلل الحمض النووي الريبي المنقى.يمكن أن يضمن Buffer PRW1 و Buffer PRW2 أن الحمض النووي الريبي الذي تم الحصول عليه غير ملوث بالبروتين والحمض النووي والأيونات والمركبات العضوية.
مكونات الطقم
| المخزن المؤقت PSL1 ، المخزن المؤقت PS ، المخزن المؤقت PSL2 |
| المخزن المؤقت PRW1 ، المخزن المؤقت PRW2 |
| RNase خالية ddH2O ، عمود تنظيف الحمض النووي |
| عمود RNA فقط |
الميزات والمزايا
■ التشغيل في درجة حرارة الغرفة (15-25 درجة مئوية) طوال العملية برمتها ، بدون حمام ثلجي وطرد مركزي بدرجة حرارة منخفضة.
■ مجموعة كاملة خالية من RNase ، لا داعي للقلق بشأن تدهور الحمض النووي الريبي.
■ مناسب بشكل خاص لتنقية الحمض النووي الريبي من عينات النباتات من السكريات والبوليفينول.
■ يرتبط عمود تنظيف الحمض النووي على وجه التحديد بالحمض النووي ، بحيث يمكن للمجموعة إزالة تلوث الحمض النووي الجيني بدون إضافة DNase.
■ إنتاجية عالية من الحمض النووي الريبي (RNA): يمكن لعمود RNA فقط والصيغة الفريدة تنقية الحمض النووي الريبي بكفاءة.
■ السرعة: سهل التشغيل ويمكن إتمامه في غضون 30 دقيقة.
■ السلامة: لا يلزم وجود كاشف عضوي.
■ جودة عالية: تتميز شظايا الحمض النووي الريبي المنقى بدرجة نقاء عالية وخالية من البروتين والشوائب الأخرى ، ويمكن أن تلبي العديد من التطبيقات التجريبية النهائية.
معلمات المنتج
■ تطبيقات المصب: توليف cDNA الأول ، RT-PCR ، الاستنساخ الجزيئي ، Northern Blot ، إلخ.
■ العينة: الأنسجة النباتية الطازجة أو المجمدة من عديد السكاريد والبوليفينول
■ الجرعة: 50 ملغ من الأنسجة النباتية
■ السعة القصوى لربط الحمض النووي الريبي لعمود التنقية: 80 ميكروغرام
■ شطف حجم: 50-200 ميكرولتر
تطبيق كيت
إنه مناسب لاستخراج وتنقية إجمالي الحمض النووي الريبي من عينات الأنسجة النباتية الطازجة أو المجمدة (خاصة أنسجة أوراق النبات الطازجة) التي تحتوي على نسبة عالية من السكاريد والبوليفينول.
تدفق العمل
رسم بياني
عالجت مجموعة عزل الحمض النووي الريبي الكلي النباتية بالإضافة إلى 50 مجم من الأوراق الطازجة من السكريات والبوليفينول ، وتم اختبار 5 ٪ من الحمض النووي الريبي المنقى عن طريق الرحلان الكهربائي.
1: الموز
2: الجنكة
3: قطن
4: الرمان
التخزين ومدة الصلاحية
يمكن تخزين هذه المجموعة لمدة 24 شهرًا في ظروف جافة في درجة حرارة الغرفة (15-25 درجة مئوية) ؛إذا كانت بحاجة إلى التخزين لفترة أطول ، فيمكن تخزينها في 2-8 ℃.
يمكن وضع المخزن المؤقت PSL1 في 4 ℃ لمدة شهر واحد بعد إضافة β-mercaptoethanol (يوصى بإضافته في نفس وقت التجربة).
العمود موصول
بعد توصيل العمود ، يتم تقليل عائد الحمض النووي الريبي أو حتى من المستحيل تنقية الحمض النووي الريبي ، وتكون كتلة الحمض النووي الريبي التي تم الحصول عليها منخفضة.
تحليل السبب الشائع:
1. فواصل العينات ليست دقيقة.
لا يتسبب كسر العينة في سد عمود تنظيف الحمض النووي تمامًا ، مع التأثير على إنتاجية الحمض النووي الريبي وجودته.نوصي بإجراء عملية طحن سريعة في كمية كافية من النيتروجين السائل عند كسر العينات ، حاول سحق جدار خلية العينة وغشاء الخلية والأنسجة الأخرى.بالنسبة لعينات نباتية من البوليول متعدد السكاريد ، نوصي باستخدام مجموعة Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.
2. عند شفط المادة الطافية للعينة المفصولة بعمود تنظيف الحمض النووي ، قد يتم استنشاق راسب الخلية المجزأ المحتمل.
ستؤدي الرواسب المجزأة بالخلية إلى عمود RNA-ONLY الذي سيتم حظره عند إجراء عملية امتزاز RNA (راجع الخطوة 6).نوصيك بحذر عند شفط هذا المادة الطافية لتجنب امتصاص حطام الخلية.
3. كمية العينة الأولية أكثر من اللازم.
سيؤدي الاستخدام المفرط للعينة إلى تجزئة عينة غير مكتملة أو تحلل خلية غير مكتمل بواسطة Buffer PSL1 ، مما يؤدي إلى انسداد عمود التنقية أثناء التنقية.طقم عزل الحمض النووي الريبي الكلي للنبات كل عينة تشغيلية منقاة هي 50 مجم.للحصول على عينات نباتية من عديد السكاريد البوليول ، نوصيك بتجربة Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.
4. درجة حرارة جهاز الطرد المركزي منخفضة للغاية.
يتم إجراء عملية عزل وتنقية الحمض النووي الريبي بالكامل في درجة حرارة الغرفة (20-25°ج) باستثناء أن أنسجة العينة تكسر بالنيتروجين السائل ، وتكون درجة حرارة بعض أجهزة الطرد المركزي المبردة أقل من 20℃، مما قد يتسبب في انسداد عمود تنظيف الحمض النووي و / أو عمود الحمض النووي الريبي فقط.إذا حدث هذا ، فاضبط درجة حرارة جهاز الطرد المركزي على 20-25℃، وتأكد من تسخين خليط التحلل و / أو المادة الطافية المضاف إليها الإيثانول إلى 37°C.
لا يوجد RNA مستخرج أو عائد RNA منخفض
عادة ما يكون هناك العديد من العوامل التي تؤثر على كفاءة الاسترداد ، مثل: عينة محتوى الحمض النووي الريبي ، طريقة التشغيل ، حجم الشطف ، إلخ.
تحليل الأسباب الشائعة على النحو التالي:
1- تم إجراء حمام جليدي أو طرد مركزي بدرجة حرارة منخفضة (4 درجات مئوية) أثناء العملية.
اقتراح: تعمل في درجة حرارة الغرفة (15-25°ج) في العملية برمتها ، لا تفعل حمام الجليد والطرد المركزي في درجة حرارة منخفضة.
2- تدهور الحمض النووي الريبي بسبب الحفظ غير السليم للعينة أو الحفاظ على العينة على المدى الطويل.
توصية: يجب تجميد العينات التي تم جمعها حديثًا بسرعة في النيتروجين السائل ، ثم تخزينها في درجة حرارة -80 درجة مئوية لفترة طويلة ، وتجنب تكرار تجميد العينات وإذابتها ؛أو على الفور نقع العينات في محلول RNAlater استقرار RNA (عينات حيوانية).
3- يؤدي عدم كفاية تفتيت وتحلل العينة إلى انسداد عمود التنقية.
اقتراح: عند طحن النسيج ، يرجى التأكد من أن النسيج مطحون بشكل كافٍ ، ونقله بسرعة إلى Buffer PSL1 المُعد مسبقًا (تأكد من إضافة النسبة الصحيحة من β-ME ، راجع الخطوة 1 من الإجراء).
4-تمت إضافة eluent بشكل غير صحيح.
اقتراح: تأكد من تجفيف ddH2O الخالي من RNase في منتصف غشاء عمود التنقية.
لم يتم إضافة الحجم الصحيح للإيثانول المطلق إلى Buffer PSL2 أو Buffer PRW2.
اقتراح: يرجى اتباع التعليمات وإضافة الحجم الصحيح من الإيثانول المطلق إلى Buffer PSL2 و Buffer PRW2 وتخلط جيدًا قبل استخدام المجموعة.
6- كمية عينة الأنسجة غير مناسبة.
اقتراح: استخدم 50 ملغ من الأنسجة لكل 500 ميكرولتر من Buffer PSL1.سيؤدي استخدام الكثير من الأنسجة إلى تقليل كمية الحمض النووي الريبي المستخرج ، كما سيتم تقليل نقاء الحمض النووي الريبي الناتج.نوصي بشدة ألا تتجاوز جرعة العينة الأولية 50 مجم لكل عملية استخراج الحمض النووي الريبي.
7. حجم شطف غير مناسب أو شطف غير كامل.
اقتراح: الحجم الصغير لعمود التنقية هو 50-200 ميكرولتر ؛إذا كان تأثير الشطف غير مُرضٍ ، فمن المستحسن تمديد الوقت في درجة حرارة الغرفة بعد إضافة RNase-Free ddH2O المسخن ، مثل 5-10min.
8- يحتوي عمود التنقية على بقايا إيثانول بعد الغسيل باستخدام BufferPRW2.
اقتراح: إذا تم الطرد المركزي للأنبوب الفارغ لمدة دقيقة واحدة ولا يزال هناك إيثانول متبقي بعد الغسيل في Buffer PRW2 ، يمكنك زيادة وقت الطرد المركزي للأنبوب الفارغ إلى دقيقتين ، أو وضع عمود التنقية في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق لإزالة الإيثانول المتبقي تمامًا.
9- تم استخدام العدة بشكل غير صحيح.
اقتراح: بالنسبة لعينات نباتية من عديد السكاريد متعدد الفينول ، فإن استخدام مجموعات شائعة مثل مجموعة عزل الحمض النووي الريبي الكلي للنبات قد لا يكون قادرًا على الحصول على عينات مثالية من الحمض النووي الريبي.نوصيك باستخدام Plant Total RNA IsolationKit Plus ، المصمم خصيصًا لعينات نبات البوليفينوليك متعدد السكاريد.مجموعة مطورة خصيصًا لاستخراج الحمض النووي الريبي من عينات نباتات البوليفينول وعديد السكاريد.
قيمة OD260 / OD280 منخفضة
يؤدي شطف الحمض النووي الريبي باستخدام ddH2O واستخدامه في قراءات مقياس الطيف الضوئي إلى انخفاض قيم OD260 / OD280.نوصي باستخدام 10 ملي مولار Tris-HCl ، ودرجة الحموضة 7.5 (بدلاً من ddH2O الخالي من RNase لاستخراج الحمض النووي الريبي) للحصول على قيم OD260 / OD280 الصحيحة نسبيًا ، راجع "فحوصات تركيز وتنقية الحمض النووي الريبي" في الصفحة 19.
يتحلل الحمض النووي الريبي المنقى
ترتبط جودة الحمض النووي الريبي المنقى بعوامل مثل حفظ العينة ، وتلوث الحمض النووي الريبي ، والتلاعب.
تحليل الأسباب الشائعة:
1- عدم تخزين عينات الأنسجة في الوقت المناسب بعد جمعها.
توصية: إذا لم يتم استخدام عينات الأنسجة في الوقت المناسب بعد الجمع ، فيرجى تخزينها في نيتروجين سائل عند درجة حرارة منخفضة على الفور أو نقلها إلى -80 درجة مئوية للتخزين طويل الأجل بعد التجميد السريع في النيتروجين السائل ، أو غمر العينات على الفور في محلول RNA المثبت RNA (عينات الحيوانات).لاستخراج الحمض النووي الريبي ، حاول استخدام عينات الأنسجة التي تم جمعها حديثًا.
2- تكرار التجميد والذوبان لعينات الأنسجة.
اقتراح: عند تخزين عينات الأنسجة ، من الأفضل تقطيعها إلى قطع صغيرة لحفظها ، وإخراج جزء منها عند استخدامها لتجنب تدهور الحمض النووي الريبي الناجم عن التجميد المتكرر والذوبان المتكرر للعينات.
3.RNase يتم إدخاله في غرفة العمليات أو عدم ارتداء القفازات والأقنعة التي تستخدم لمرة واحدة وما إلى ذلك.
اقتراح: من الأفضل إجراء تجارب استخراج الحمض النووي الريبي في عمليات RNA منفصلة ، ويجب تنظيف طاولة المختبر قبل التجربة ، ويجب ارتداء القفازات والأقنعة التي يمكن التخلص منها أثناء التجربة لتجنب تدهور الحمض النووي الريبي الناجم عن إدخال RNase إلى أقصى حد.
4 الكاشف ملوث بـ RNase أثناء الاستخدام.
اقتراح: استبدل بسلسلة جديدة من مجموعات استخراج الحمض النووي الريبي للنباتات للتجارب ذات الصلة.
5- أنابيب الطرد المركزي وأطراف الماصة المستخدمة في معالجة الحمض النووي الريبي ملوثة بـ RNase.
اقتراح: تأكد من أن أنابيب أجهزة الطرد المركزي ، وأطراف الماصة ، والماصات ، وما إلى ذلك المستخدمة في استخراج الحمض النووي الريبي ، كلها خالية من RNase.
كتيبات التعليمات:
دليل تعليمات مجموعة عزل الحمض النووي الريبي الكلي للنبات
