طقم عزل الحمض النووي الريبي (RNA) الحيواني مجموع مجموعات استخراج وتنقية الحمض النووي الريبي (RNA) لأنسجة وخلايا الحيوانات
وصف المجموعة:
استخراج الحمض النووي الريبي الكلي عالي النقاء وعالي الجودة من الأنسجة الحيوانية المختلفة بسرعة وكفاءة.
لا داعي للقلق بشأن تدهور الحمض النووي الريبي.النظام بأكمله خالٍ من RNase
إزالة الحمض النووي بشكل فعال باستخدام عمود تنظيف الحمض النووي
إزالة الحمض النووي دون إضافة DNase
بسيطة — كل العمليات تتم في درجة حرارة الغرفة
سريع - يمكن إتمام العملية في 30 دقيقة
آمن - لا يستخدم كاشف عضوي
درجة نقاء عالية — OD260 / 280-1.8-2.1
أوصاف الأطقم
50 الإعدادية ، 200 الإعدادية
تستخدم هذه المجموعة ملفعمود الدوران والصيغةتم تطويره بواسطة شركتنا ، والتي يمكنها استخراج الحمض النووي الريبي الكلي عالي النقاء وعالي الجودة من أنسجة حيوانية مختلفة بكفاءة عالية ، ويوفر عمودًا فعالًا لتنظيف الحمض النووي ، والذي يمكنه بسهولة فصل الحمض النووي الجيني وامتصاصه عن المادة الطافية ومحلل الأنسجة ، وبسيط وموفر للوقت ؛يمكن لعمود الحمض النووي الريبي فقط ربط الحمض النووي الريبي بكفاءة ويمكن معالجته في وقت واحد باستخدام صيغة فريدة الكثير من العينات.
النظام بأكمله خالٍ من RNase ، بحيث لا يتحلل الحمض النووي الريبي المستخرج ؛Buffer RW1 ، نظام الغسيل العازل Buffer RW2 ، بحيث يكون الحمض النووي الريبي الذي تم الحصول عليه خاليًا من البروتين ، والحمض النووي ، والأيون ، والتلوث المركب العضوي.
مكونات الطقم
| طقم عزل الحمض النووي الريبي الكلي للحيوان | ||
| مكونات الطقم | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 ت | 200 ت | |
| العازلة RL1 * | 25 مل | 100 مل |
| العازلة RL2 | 15 مل | 60 مل |
| العازلة RW1 * | 25 مل | 100 مل |
| العازلة RW2 | 24 مل | 96 مل |
| RNase خالية من ddH2O | 10 مل | 40 مل |
| عمود RNA فقط | 50 | 200 |
| عمود تنظيف الحمض النووي | 50 | 200 |
| كتيب التعليمات | 1 قطعة | 1 قطعة |
معلومات المنتج
| شكل | عمود الدوران | مكون التنقية | العمود الأمامي ، كاشف |
| تدفق | 1-24 عينة | الوقت لكل إعداد | ~ 30 دقيقة (24 عينة) |
| جهاز الطرد المركزي | مكتب الطرد المركزي | فصل الانحلال الحراري | فصل الطرد المركزي |
| عينة | أنسجة حيوانيةخلية | كمية العينات | الأنسجة: 10-20 ملغ ؛الخلية: (1-5) × 106 |
| حجم شطف | 50-200 ميكرولتر | حجم التحميل الأقصى | 850 ميكرولتر |
الميزات والمزايا
■ لا داعي للقلق بشأن تدهور الحمض النووي الريبي.النظام بأكمله خالٍ من RNase
■ إزالة عمود تنظيف الحمض النووي بشكل فعال باستخدام الحمض النووي
■ إزالة الحمض النووي دون إضافة DNase
■ تتم جميع العمليات البسيطة في درجة حرارة الغرفة
■ يمكن إتمام التشغيل السريع في 30 دقيقة
■ مطلوب كاشف عضوي آمن - غير مطلوب
■ درجة نقاء عالية -OD260 / 280≈1.8-2.1
تطبيق كيت
إنها مناسبة لاستخراج وتنقية إجمالي الحمض النووي الريبي من مجموعة متنوعة من الأنسجة الحيوانية الطازجة أو المجمدة أو الخلايا المستنبتة.
معلمات المنتج
■ تطبيقات المصب: توليف cDNA الأول ، RT-PCR ، الاستنساخ الجزيئي ، Northern Blot ، إلخ.
■ العينات: الأنسجة الحيوانية ، والخلايا المستنبتة
■ الجرعة: مناديل 10-20 مجم ، خلايا (2-5) × 106
■ السعة القصوى لربط الحمض النووي لعمود التنقية: 80 ميكروغرام
■ شطف حجم: 50-200 ميكرولتر
رسم بياني
مجموعة عزل الحمض النووي الريبي مجموع الحيوانات المعالجة 20 ملغ
عينات الفئران الطازجة ، تأخذ 5 ٪ من إجمالي الحمض النووي الريبي المنقى 1 ٪ أجار
الرحلان الكهربائي للجليكوجيل
1: الطحال 2: الكلى
3: الكبد 4: القلب
التخزين ومدة الصلاحية
يمكن تخزين المجموعة لمدة 24 شهرًا في درجة حرارة الغرفة (15-25 درجة مئوية) أو 2-8 درجة مئوية لفترة أطول.يمكن تخزين المخزن المؤقت RL1 في 4 ℃ لمدة شهر واحد بعد إضافة β- مركابتوإيثانول (اختياري).
المقالات المقتبس منها
1.إذا: 18.808:Zheng ، Q. ، Qin ، F. ، Luo ، R. ، et al.الجسيمات النانوية الشبيهة بالدهون المحملة بالـ mRNA لتحرير قاعدة الكبد عن طريق تحسين التصميم المركب المركزي.حال.Funct.ماتر.2021، 31، 2011068.doi: 10.1002 / adfm.202011068.
2.إذا: 18.187:هي إكس ، هونغ دبليو ، يانغ جي ، وآخرون.يؤدي موت الخلايا المبرمج التلقائي للخلايا في تحضير الخلايا الجذعية العلاجية إلى تأثيرات مناعية من خلال إطلاق فوسفاتيديل سيرين.هناك هدف تحويل الإشارة.2021 يوليو 14 ؛ 6 (1): 270.دوى: 10.1038 / s41392-021-00688-z.
3.إذا: 17.97: Dai Z ، Liu H ، Liao J ، et al.تعديل الحمض النووي الريبي N7-Methylguanosine يعزز ترجمة mRNA الورمية ويعزز تطور سرطان القنوات الصفراوية داخل الكبد.خلية مول.2021 29 يوليو: S1097-2765 (21) 00555-4.دوى: 10.1016 / j.molcel.2021.07.003.
4.إذا: 9.225: Cao X و Shu Y و Chen Y وآخرون.يسهل تعديل m6A Mettl14 بوساطة تجديد الكبد من خلال الحفاظ على التوازن الداخلي للشبكية.خلية مول جاسترونتيرول هيباتول.2021 ؛ 12 (2): 633-651.دوى: 10.1016 / j.jcmgh.2021.04.001.
مجموعات مساواة الحمض النووي الريبي لـ مصادر عينة أخرىتتوفر:
خلية ، نبات ، فيروسي ، دم ، إلخ.
لا يتم استخراج الحمض النووي الريبي أو أن إنتاجية الحمض النووي الريبي منخفضة
غالبًا ما توجد مجموعة متنوعة من العوامل التي تؤثر على كفاءة الاسترداد ، مثل: محتوى عينة الأنسجة من الحمض النووي الريبي ، وطريقة التشغيل ، وحجم الشطف ، وما إلى ذلك.
1. تم إجراء حمام الجليد أو الطرد المركزي المبرد (4 درجات مئوية) أثناء العملية.
توصية: تعمل في درجة حرارة الغرفة (15-25 درجة مئوية) طوال العملية برمتها ، لا تستخدم حمام ثلجي وأجهزة الطرد المركزي في درجات حرارة منخفضة.
2. حفظ العينة بشكل غير لائق أو وقت تخزينها المفرط.
توصية: تخزين العينات في درجة حرارة -80 درجة مئوية أو تجميدها في النيتروجين السائل وتجنب الاستخدام المتكرر للتجميد والذوبان ؛حاول استخدام الأنسجة الطازجة أو الخلايا المستنبتة لاستخراج الحمض النووي الريبي.
3. تحلل العينة غير الكافي.
توصية: عند تجانس الأنسجة ، تأكد من أن الأنسجة متجانسة بدرجة كافية وأن خلايا الأنسجة مقسمة بشكل كافٍ لشرح إطلاق الحمض النووي الريبي.
4. لم يتم إضافة eluent بشكل صحيح.
توصية: تأكد من أن ddH الخالي من RNase2يضاف O بالتنقيط إلى منتصف غشاء عمود التنقية.
5. لم يتم إضافة الحجم الصحيح من الإيثانول المطلق إلى Buffer RL2 أو Buffer RW2.
توصية: اتبع التعليمات ، أضف الحجم الصحيح من الإيثانول المطلق إلى Buffer RL2 و Buffer RW2 واخلط جيدًا قبل استخدام المجموعة.
6. جرعة عينة الأنسجة ليست مناسبة.
التوصية: استخدم 10-20 مجم من الأنسجة أو (1-5) × 106خلايا لكل 500 ميكرولتر من المخزن المؤقت RL1 ، حيث يمكن أن يؤدي الاستخدام المفرط للأنسجة إلى تقليل استخراج الحمض النووي الريبي.
7. حجم شطف غير لائق أو شطف غير كامل.
التوصية: حجم الشطف لعمود التنقية هو 50-200 ميكرولتر ؛إذا لم يكن تأثير الشطف مرضيًا ، يوصى بتمديد وقت وضع درجة حرارة الغرفة بعد إضافة RNase-Free ddH2O ، على سبيل المثال لمدة 5-10 دقائق.
8- يحتوي عمود التنقية على بقايا إيثانول بعد غسل العازلة RW2.
توصية: إذا كان هناك بقايا من الإيثانول بعد غسل Buffer RW2 ، فإن الطرد المركزي للأنبوب الفارغ لمدة دقيقة واحدة ، ويمكن زيادة وقت عملية الطرد المركزي للأنبوب الفارغ إلى دقيقتين ، أو يمكن وضع عمود التنقية في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق لإزالة الإيثانول المتبقي بشكل مناسب.
تنقية الحمض النووي الريبي يتحلل
ترتبط جودة الحمض النووي الريبي المنقى بعوامل مثل الحفاظ على العينة ، وتلوث الحمض النووي الريبي ، والتلاعب ، إلخ.
1. لا يتم الاحتفاظ بعينات الأنسجة في الوقت المناسب.
توصية: إذا لم يتم استخدام عينات الأنسجة أو الخلايا في الوقت المناسب بعد جمعها ، قم بالحفظ بالتبريد على الفور عند -80 درجة مئوية أو النيتروجين السائل.لاستخراج الحمض النووي الريبي ، استخدم عينة من الأنسجة أو الخلايا المأخوذة حديثًا كلما أمكن ذلك.
2. ذوبان الجليد المتكرر لعينات الأنسجة.
توصية: عند تخزين عينات الأنسجة ، من الأفضل تقطيعها إلى قطع صغيرة لحفظها ، وإزالة إحدى القطع عند استخدامها لتجنب الذوبان المتكرر للعينة وتلف الحمض النووي الريبي.
3. يتم إدخال RNase أو عدم ارتداء القفازات والأقنعة التي تستخدم لمرة واحدة وما إلى ذلك أثناء العملية.
توصية: من الأفضل إجراء تجارب استخراج الحمض النووي الريبي في غرف منفصلة لمعالجة الحمض النووي الريبي ويتم مسح الجدول قبل التجربة.
قم بارتداء القفازات والأقنعة التي تستخدم لمرة واحدة أثناء التجربة لتقليل تدهور الحمض النووي الريبي الناجم عن إدخال RNase.
4. تلوث الكواشف بـ RNase أثناء الاستخدام.
توصية: استبدل بمجموعة جديدة لعزل الحمض النووي الريبي الكلي للحيوان للتجارب ذات الصلة.
5. أنابيب الطرد المركزي ، الرؤوس ، إلخ المستخدمة في معالجة RNA ملوثة بـ RNase.
توصية: تأكد من أن أنابيب أجهزة الطرد المركزي ، والنصائح ، والماصات ، وما إلى ذلك المستخدمة في استخراج الحمض النووي الريبي ، كلها خالية من RNase.
يؤثر الحمض النووي الريبي المنقى الذي تم الحصول عليه على تجارب المصب
RNA المنقى بواسطة عمود التنقية ، إذا كانت أيونات الملح ، محتوى البروتين كبير جدًا سيؤثر على تجربة المصب ، مثل: النسخ العكسي ، Northern Blot et al.
1. يحتوي الحمض النووي الريبي المستخلص على بقايا أيونات الملح.
توصية: تأكد من إضافة الحجم الصحيح من الإيثانول إلى Buffer RW2 وإجراء عمليتي غسيل لعمود التنقية بسرعة الطرد المركزي المشار إليها للتشغيل ؛إذا كان هناك أي بقايا أيون ملح ، اترك عمود التنقية للمخزن المؤقت RW2 لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة وقم بإجراء الطرد المركزي لتعظيم إزالة تلوث الملح.
2. بقايا الإيثانول في الحمض النووي الريبي المصفى.
توصية: تأكد من أنه بعد غسل المخزن المؤقت RW2 ، قم بإجراء عملية الطرد المركزي للأنبوب الفارغ بسرعة الطرد المركزي المحددة للتشغيل ، وقم بزيادة وقت عملية الطرد المركزي للأنبوب الفارغ إلى دقيقتين إذا كان لا يزال هناك بقايا من الإيثانول ، أو اتركه في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق بعد طرد الأنبوب الفارغ لزيادة إزالة بقايا الإيثانول.
