مجموعة الخلايا qPCR المباشرة RT - SYBR GREEN I Direct خلية تحلل الخلايا جاهزة بخطوة واحدة مجموعات qRT-PCR
الأوصاف
تستخدم هذه المجموعة نظامًا عازلًا فريدًا للتحلل يمكنه إطلاق RNA بسرعة من عينات الخلايا المستزرعة لتفاعلات RT-qPCR ، وبالتالي القضاء على عملية تنقية الحمض النووي الريبي المستهلكة للوقت والشاقة.يمكن الحصول على قالب RNA في 7 دقائق فقط.5×Direct RT Mix و 2×يمكن لكواشف qPCR Mix-SYBR المباشرة التي توفرها المجموعة الحصول بسرعة وفعالية على نتائج PCR الكمية في الوقت الفعلي.
5×Direct RT Mix و 2×يتمتع qPCR Mix-SYBR المباشر بتسامح قوي للمثبط ، ويمكن استخدام محللة العينات كقالب لـ RT-qPCR مباشرة.تحتوي هذه المجموعة على النسخ العكسي الفريد من نوع RNA الفريد عالي التقارب ، و Hot D-Taq DNA polymerase ، dNTPs ، MgCl2، عازلة رد الفعل ، محسن PCR ومثبت.
تحديد
200×20μل Rxns ، 1000×20μل Rxns
مكونات الطقم
| الجزء الأول | العازلة CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| العازلة ST | |
| الجزء الثاني | ممحاة الحمض النووي |
| 5 × Direct RT Mix | |
| 2 × مباشر qPCR Mix-SYBR | |
| 50 × صبغة مرجعية ROX | |
| RNase خالية من ddH2O | |
| تعليمات | |
الميزات والمزايا
■بسيطة وفعالة: باستخدام تقنية Cell Direct RT ، يمكن الحصول على عينات RNA في 7 دقائق فقط.
■ الطلب على العينة صغير ، حيث يمكن اختبار 10 خلايا.
■ إنتاجية عالية: يمكنها اكتشاف الحمض النووي الريبي بسرعة في الخلايا المزروعة في 384 ، 96 ، 24 ، 12 ، 6 ألواح.
■ يمكن لممحاة الحمض النووي أن تزيل الجينومات التي تم إصدارها بسرعة ، وتقلل بشكل كبير من التأثير على النتائج التجريبية اللاحقة.
■ يجعل نظام RT و qPCR المحسن النسخ العكسي RT-PCR المكون من خطوتين أكثر كفاءة و PCR أكثر تحديدًا وأكثر مقاومة لمثبطات تفاعل RT-qPCR.
تطبيق كيت
نطاق التطبيق: الخلايا المستزرعة.
- الحمض النووي الريبي الصادر عن تحلل العينة: ينطبق فقط على قالب RT-qPCR لهذه المجموعة.
- يمكن استخدام المجموعة للأغراض التالية: تحليل التعبير الجيني ، والتحقق من تأثير إسكات الجينات بوساطة سيرنا ، وفحص الأدوية ، وما إلى ذلك.
رسم بياني
التخزين ومدة الصلاحية
يجب تخزين الجزء الأول من هذه المجموعة في 4 ℃ ؛يجب تخزين الجزء الثاني في -20 درجة مئوية.
يجب تخزين Foregene Protease Plus II في 4℃ ، لا تجمد عند -20 ℃.
الكاشف 2×يجب تخزين qPCR Mix-SYBR المباشر عند -20℃في الظلام؛إذا تم استخدامه بشكل متكرر ، فيمكن تخزينه أيضًا في 4℃ للتخزين قصير الأجل (يستخدم في غضون 10 أيام).
مبادئ تصميم الوقت الحقيقي PCR التمهيدي
التمهيدي الأمامي والعكس التمهيدي
بالنسبة لـ Real Time PCR ، يعد التصميم التمهيدي مهمًا جدًا.ترتبط المواد الأولية بخصوصية وكفاءة تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل ، ويمكن تصميمها بالرجوع إلى المبادئ التالية:
طول التمهيدي: 18-30 نقطة أساس.
محتوى GC: 40-60٪.
قيمة Tm: يمكن لبرنامج تصميم Primer ، مثل Primer 5 ، أن يعطي قيمة Tm للبرايمر.يجب أن تكون قيم Tm للاشعال في المنبع والمصب أقرب ما يمكن.يمكن أيضًا استخدام صيغة حساب Tm: Tm = 4 ° C (G + C) + 2 ° C (A + T).عند إجراء PCR ، يتم تحديد درجة حرارة أقل من قيمة Tm التمهيدي البالغة 5 درجات مئوية كدرجة حرارة التلدين (يمكن أن تؤدي الزيادة المقابلة في درجة حرارة التلدين إلى زيادة خصوصية تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل).
مواد التمهيدي ومنتجات PCR:
يفضل أن يكون طول منتج تضخيم PCR التمهيدي 100-150bp.
يجب تجنب استخدام البادئات المصممة في المنطقة الهيكلية الثانوية للقالب قدر الإمكان.
تجنب تكوين قاعدتين أو أكثر من القواعد التكميلية بين النهايات الثلاثية للبادئات الأولية والنهائية.
لا يمكن أن توجد القاعدة الطرفية التمهيدي 3 مع 3 G أو C متتالية إضافية.
لا يمكن أن تحتوي البادئات نفسها على بنى تكميلية ، وإلا سيتم تشكيل هيكل دبوس الشعر ، مما يؤثر على تضخيم PCR.
يجب توزيع ATCG بالتساوي قدر الإمكان في تسلسل التمهيدي ، ويجب تجنب القاعدة الطرفية 3 مثل T.
التذييل 1 ، حزمة ملحق مكون Cell Direct RT-qPCR Kit
1.محلول تحلل الخلية
|
| |||
| مكونات الطقم (نظام تحلل 24 بئر / بئر) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ت | 500 ت | ||
| جزءأنا | العازلة CL | 20 مل | 100 مل |
| Foregene Protease Plus II | 400 ميكرولتر | 1 مل × 2 | |
| العازلة ST | 1 مل × 2 | 10 مل | |
| جزءثانيًا | ممحاة الحمض النووي | 400 ميكرولتر | 1 مل × 2 |
2.RT ميكس
|
| |
| مكونات الطقم (نظام تفاعل 20 ميكرولتر) | DRT-01011-B1 |
| 200 ت | |
| 5 × Direct RT Mix | 800 ميكرولتر |
| RNase خالية ddH2O | 1.7 مل × 2 |
|
| ||
| مكونات الطقم (نظام تفاعل 20 ميكرولتر) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 ت | 1000 ت | |
| 2 × مباشر qPCR Mix-SYBR | 1 مل × 2 | 1.7 مل × 6 |
| 50 × صبغة مرجعية ROX | 40 ميكرولتر | 200 ميكرولتر |
| RNase خالية ddH2O | 1.7 مل | 10 مل |
كتيبات التعليمات:
