دليل تحليل المشكلة

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

غلة منخفضة أو عدم وجود حمض نووي

عادة ما يكون هناك العديد من العوامل التي تؤثر على إنتاجية الحمض النووي الجيني ، بما في ذلك مصدر العينة ، وعمر العينة ، وظروف تخزين العينة ، والعملية.

لا يمكن الحصول على الحمض النووي الجيني أثناء الاستخراج

1. يتم تخزين عينات الأنسجة أو تخزينها بشكل غير صحيح لفترة طويلة جدًا ، مما يؤدي إلى تدهور الحمض النووي الجيني.

التوصية: تخزين عينات الأنسجة في النيتروجين السائل أو -20°ج ؛حاول استخدام العينات التي تم جمعها حديثًا لاستخراج الحمض النووي الجيني.

2. قد تتسبب كمية العينة الضئيلة جدًا في عدم استخراج الحمض النووي الجيني المقابل.

اقتراح: بالنسبة لعينات الأنسجة التي تم تخزينها لفترة طويلة أو التي تعاني من تدهور شديد في الحمض النووي الجيني ، يمكن زيادة كمية عينات الأنسجة بشكل مناسب من أجل استخراج الحمض النووي الجيني الكبير.يمكن تحديد كمية العينة وفقًا لاحتياجات الحمض النووي ، ولكن يجب ألا تتجاوز العينة الجديدة 100 مجم ، ويجب ألا تتجاوز العينة الجافة 30 مجم.

3. لا يتم طحن العينة بالنيتروجين السائل أو وضعها لفترة طويلة بعد النيتروجين السائل.

اقتراح: أثناء استخلاص الحمض النووي ، يجب أن تكون العينة مطحونة بالكامل بالنيتروجين السائل لكسر جدار الخلية ؛بعد الطحن ، يرجى نقل مسحوق العينة إلى PL1 مسخن مسبقًا عند 65°C في أقرب وقت ممكن (بمجرد ذوبان مسحوق الأرض ، سيبدأ الحمض النووي الجيني في التدهور بسرعة).

4. التخزين غير السليم للبروتياز Foregene يؤدي إلى انخفاض أو تعطيل النشاط.

توصية: تأكيد شروط تخزين Foregene Protease أو استبداله بـ Foregene Protease جديد للتحلل الأنزيمي.

5. تم تخزين المجموعة أو تخزينها بشكل غير صحيح لفترة طويلة جدًا ، مما يتسبب في فشل بعض مكونات المجموعة.

توصية: شراء مجموعة جديدة لاستخراج الحمض النووي الجيني للنبات للعمليات ذات الصلة.

6. الاستخدام غير السليم للمجموعة.

اقتراح: شراء مجموعة عزل الحمض النووي للنباتات المخصصة لعينات لاستخراج وتنقية الحمض النووي الجيني للنبات.

7. عازلة WB دون إضافة ألا مائي الإيثانول.

توصية: تأكد من إضافة الحجم الصحيح من الإيثانول المطلق إلى Buffer WB.

8. لم يتم تقطر eluent على غشاء السيليكا بشكل صحيح.

اقتراح: أضف eluent المسخن مسبقًا عند 65℃بالتنقيط إلى منتصف غشاء هلام السيليكا ، واتركه في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق لزيادة كفاءة الشطف.

الاستخراج للحصول على الحمض النووي الجيني منخفض الغلة

1. يتم تخزين العينة أو تخزينها بشكل غير صحيح لفترة طويلة جدًا ، مما يؤدي إلى تدهور الحمض النووي الجيني.

التوصية: تخزين عينات الأنسجة في -20℃؛حاول استخدام عينات الأنسجة التي تم جمعها حديثًا لاستخراج الحمض النووي الجيني.

2. إذا كانت كمية عينات الأنسجة صغيرة جدًا ، فسيكون الحمض النووي الجيني المستخرج أقل.

اقتراح: بعض عينات النباتات غنية بالمياه ، مثل النباتات المائية مثل الطحالب وما إلى ذلك ، يمكن زيادة الجرعة بشكل مناسب أو يمكن تجفيف الماء قليلاً قبل العملية.

3. لم يتم طحن العينات تمامًا باستخدام النيتروجين السائل أو تركها في درجة حرارة الغرفة لفترة طويلة جدًا بعد الطحن.

اقتراح: يجب أن يكون طحن النيتروجين السائل كافياً ، ويجب كسر جدار خلية العينة قدر الإمكان ؛مباشرة بعد الطحن ، يجب نقل مسحوق العينة إلى 65℃مسخن Buffer PL1 للخطوة التالية.

4. عدم استخدام المجموعة الصحيحة.

توصية: استخدم مجموعة مخصصة لعزل الحمض النووي للنبات لاستخراج وتنقية الحمض النووي الجيني للنبات.

5. التخزين غير السليم للبروتياز Foregene يؤدي إلى انخفاض أو تعطيل النشاط.

توصية: تأكيد شروط تخزين Foregene Protease أو استبداله بـ Foregene Protease جديد للتحلل الأنزيمي.

6. Eluent مشكلة

توصية: الرجاء استخدام Buffer EB للشطف ؛في حالة استخدام ddH₂O أو شطفات أخرى ، تأكد من أن الرقم الهيدروجيني لـ eluent بين 7.0-8.5.

7. لم يتم تقطر شطف بشكل صحيح

اقتراح: يرجى إضافة قطرة الشطف إلى منتصف غشاء السيليكا وتركها في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق لزيادة كفاءة الشطف.

8. حجم شطف صغير جدًا

اقتراح: يرجى استخدام eluent لشطف الحمض النووي الجيني وفقًا للتعليمات على الأقل 100ميكرولتر.

استخراج الحمض النووي الجيني بنقاوة منخفضة

سيؤدي النقاء المنخفض للحمض النووي الجيني إلى فشل التجارب النهائية أو ضعف تأثيرها ، مثل: لا يمكن قطع الإنزيم ، ولا يمكن الحصول على جزء الجين المستهدف بواسطة تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR).

1. التلوث البروتيني المتنوع ، تلوث الحمض النووي الريبي.

التحليل: لم يتم استخدام Buffer PW لغسل العمود ؛لم يتم استخدام Buffer PW لغسل العمود بسرعة الطرد المركزي الصحيحة.

اقتراح: حاول التأكد من عدم وجود ترسيب في المادة الطافية عند تمرير المادة الطافية عبر العمود ؛تأكد من غسل عمود التنقية باستخدام Buffer PW وفقًا للتعليمات ، ولا يمكن حذف هذه الخطوة.

2. التلوث الأيوني الشوائب.

التحليل: تم حذف عمود غسل Buffer WB أو غسله مرة واحدة فقط ، مما أدى إلى تلوث أيوني متبقي.

توصية: تأكد من غسل مرتين باستخدام Buffer WB وفقًا للتعليمات لإزالة الأيونات المتبقية قدر الإمكان.

3. تلوث RNase.

التحليل: يضاف RNase خارجي إلى المخزن المؤقت ؛ستؤدي عملية الغسيل غير الصحيحة في Buffer PW إلى RNase المتبقية وتؤثر على العمليات التجريبية لـ RNA في المصب ، مثل النسخ في المختبر.

اقتراح: يمكن لمجموعات استخراج الحمض النووي من سلسلة Foregene إزالة الحمض النووي الريبي بدون RNase إضافي ، ولا تحتاج جميع الكواشف الموجودة في مجموعة عزل الحمض النووي للنبات إلى RNase ؛تأكد من غسل عمود التنقية باستخدام Buffer PW وفقًا للتعليمات ، ولا يمكن حذف هذه الخطوة.

4. بقايا الايثانول.

التحليل: بعد غسل عمود التنقية باستخدام Buffer WB ، لم يتم إجراء الطرد المركزي للأنبوب الفارغ.

توصية: اتبع التعليمات الخاصة بالطرد المركزي الأنبوب الفارغ المناسب.

كتيب التعليمات:

دليل تعليمات مجموعة عزل الحمض النووي للنبات