لا توجد إشارات تضخيم

1.يفقد Taq DNA Polymerase في المجموعة نشاطه بسبب التخزين غير السليم أو انتهاء صلاحية المجموعة.
توصية: تأكيد شروط تخزين المجموعة ؛إعادة إضافة كمية مناسبة من Taq DNA Polymerase إلى نظام PCR أو شراء مجموعة Real Time PCR جديدة للتجارب ذات الصلة.

2. هناك الكثير من مثبطات Taq DNA Polymerase في قالب DNA.
اقتراح: أعد تنشيط النموذج أو قلل من كمية النموذج المستخدم.

3-تركيز Mg2 + غير مناسب.
التوصية: تركيز Mg2 + لـ 2 × Real PCR Mix الذي نقدمه هو 3.5mM.ومع ذلك ، بالنسبة لبعض البادئات والقوالب الخاصة ، قد يكون تركيز Mg2 + أعلى.لذلك ، يمكنك إضافة MgCl2 مباشرة لتحسين تركيز Mg2 +.يوصى بزيادة Mg2 + 0.5mM في كل مرة للتحسين.

4-ظروف تضخيم PCR غير مناسبة ، وتسلسل التمهيدي أو التركيز غير لائق.
اقتراح: تأكد من صحة تسلسل التمهيدي ولم يتحلل التمهيدي ؛إذا كانت إشارة التضخيم غير جيدة ، فحاول خفض درجة حرارة التلدين وضبط تركيز التمهيدي بشكل مناسب.

5- كمية النموذج قليلة جدًا أو كثيرة جدًا.
توصية: قم بإجراء تخفيف التدرج الخطي للقالب ، وحدد تركيز القالب مع أفضل تأثير PCR لتجربة Real Time PCR.

يحتوي NTC على قيمة مضان عالية جدًا

1. التلوث الناتج أثناء العملية.
توصية: الاستبدال بكواشف جديدة لتجارب تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي.

2 - حدث تلوث أثناء تحضير نظام تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل.
توصية: اتخذ التدابير الوقائية اللازمة أثناء التشغيل ، مثل: ارتداء قفازات من اللاتكس ، واستخدام طرف ماصة مزود بفلتر ، وما إلى ذلك.

3- تحلل البادئات ، وسيؤدي تحلل البادئات إلى تضخيم غير محدد.
اقتراح: استخدم الرحلان الكهربائي SDS-PAGE لاكتشاف ما إذا كانت البادئات متدهورة ، واستبدلها بأجهزة أولية جديدة لتجارب تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي.

التمهيدي ديمر أو التضخيم غير المحدد

1- تركيز Mg2 + غير مناسب.
التوصية: تركيز Mg2 + لـ 2 × Real PCR EasyTM Mix الذي نقدمه هو 3.5 ملم.ومع ذلك ، بالنسبة لبعض البادئات والقوالب الخاصة ، قد يكون تركيز Mg2 + أعلى.لذلك ، يمكنك إضافة MgCl2 مباشرة لتحسين تركيز Mg2 +.يوصى بزيادة Mg2 + 0.5mM في كل مرة للتحسين.

2 إن درجة حرارة التلدين PCR منخفضة للغاية.
اقتراح: زيادة درجة حرارة التلدين PCR بمقدار 1 أو 2 في كل مرة.

3. المنتج PCR طويل جدا.
توصية: يجب أن يتراوح طول منتج Real Time PCR بين 100-150 نقطة أساس ، وليس أكثر من 500 نقطة أساس.

4 - البادئات متدهورة ، وسيؤدي تحلل البادئات إلى ظهور تضخيم محدد.
اقتراح: استخدم الرحلان الكهربائي SDS-PAGE لاكتشاف ما إذا كانت البادئات متدهورة ، واستبدلها بأجهزة أولية جديدة لتجارب تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي.

5.نظام PCR غير صحيح ، أو أن النظام صغير جدًا.
اقتراح: نظام تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل صغير جدًا سيؤدي إلى تقليل دقة الكشف.من الأفضل استخدام نظام التفاعل الذي أوصت به أداة PCR الكمية لإعادة تشغيل تجربة Real Time PCR.

ضعف التكرار من القيم الكمية

1. الجهاز معطل.
اقتراح: قد تكون هناك أخطاء بين كل ثقب من فتحات تفاعل البوليميراز المتسلسل للأداة ، مما يؤدي إلى ضعف التكاثر أثناء إدارة درجة الحرارة أو الكشف عنها.يرجى التحقق وفقًا لتعليمات الأداة المقابلة.

2. نقاء العينة ليست جيدة.
توصية: ستؤدي العينات غير النقية إلى ضعف استنساخ التجربة ، والذي يتضمن نقاء القالب والبادئات.من الأفضل إعادة ترطيب القالب ، ويتم تنقية المواد الأولية بشكل أفضل بواسطة SDS-PAGE.

3- وقت إعداد وتخزين نظام PCR طويل جدًا.
اقتراح: استخدم نظام تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي لتجربة تفاعل البوليميراز المتسلسل مباشرة بعد التحضير ، ولا تتركه جانباً لفترة طويلة.

4-ظروف تضخيم PCR غير مناسبة ، وتسلسل التمهيدي أو التركيز غير لائق.
اقتراح: تأكد من صحة تسلسل التمهيدي ولم يتحلل التمهيدي ؛إذا كانت إشارة التضخيم غير جيدة ، فحاول خفض درجة حرارة التلدين وضبط تركيز التمهيدي بشكل مناسب.

5.نظام PCR غير صحيح ، أو أن النظام صغير جدًا.
اقتراح: نظام تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل صغير جدًا سيؤدي إلى تقليل دقة الكشف.من الأفضل استخدام نظام التفاعل الذي أوصت به أداة PCR الكمية لإعادة تشغيل تجربة Real Time PCR.