(96-جيدا) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit - SYBR Green I
الأوصاف
ال(96 جيدا) سريعة سهلةTM طقم الخلية المباشر RT-qPCR-SYBR الأخضر أنايوفرنظام عازلة فريد من نوعهto الافراج بسرعة عن الحمض النووي الريبيمن خلية مثقفةعينات لتفاعلات RT-qPCR ، مما يلغي الوقت المستغرق والشاقعملية تنقية RNA ، وتستغرق 7 دقائق فقط للحصول على قالب RNA المطلوب.ال5 × Direct RT Mixو2 × مباشر qPCR Mix-SYBRالواردة في المربع يمكن بسرعة والحصول بشكل فعال على الكمية في الوقت الحقيقينتائج PCR.
يتمتع كل من 5 × Direct RT Mix و 2 × Direct qPCR Mix-SYBR بتسامح قوي للمثبط ، ويمكنهما استخدام محلول العينة المراد اختبارها كقالب للنسخ العكسي الفعال والتضخيم المحدد.يحتوي الكاشف على نسخة عكسية فريدة من نوعها من Foregene مع تقارب عالي لـ RNA ، بالإضافة إلى Hot D- Taq DNA Polymerase و dNTPs و MgCl2 ، مخزن مؤقت للتفاعل ، محسن ومثبت PCR ، ويمكن استخدامه مع المخزن المؤقت للتحلل لاكتشاف العينة بسرعة وسهولة ودقة ، وله خصائص حساسية عالية وخصوصية قوية واستقرار جيد.
تهدف هذه المجموعة إلى تحلل النظام الدقيق لخلايا 96 مستنبت جيدًا ، وتتميز بتوحيد واتساق جيد ؛توفر مكونات المجموعة 96 تفاعل تحلل ، و 96 تفاعل نسخ عكسي و 96 × 2 تفاعلات qPCR ، والتي يمكن أن تلبي لوحة 96 خلية للاستخدام لمرة واحدة ، وتجنب التلوث الناجم عن الفتح المتكرر والتجميد والذوبان للكواشف وتدهور أداء الكاشف.
مكونات الطقم
| تكوين المجموعة ( 50 μنظام تحلل L / 20 ميكرولترRT نظام التفاعل / 20μنظام رد الفعل L qPCR) | DRT-03011 | ملاحظة | |
| 96 ت | |||
| جزءI | متعادلCL | 5 مل | خليةتحلل |
| فورجينبروتياز بلس II | 100 μL | ||
| متعادلST | 500 μL | ||
| جزء II | الحمض النوويممحاة | 100 μL | |
| 5 × Direct RT Mix | 400 μL | RT | |
| 2 × مباشر qPCR ميكس-SYBR | 1 مL × 2 | qPCR | |
| 50 × صبغة مرجعية ROX | 400µL | ||
| RNase- حرddH2 O | 1.7 مل |
| |
| Manual | 1 قطعة | 1 حصة | |
*: يتم تضمين ممحاة DNA كاشف التحلل في الجزء الثاني من المجموعة ؛يمكن شراء مكونات Cell Lysis و RT و qPCR بشكل منفصل.
الميزات والمزايا
■بسيطة وفعالة: باستخدام تقنية Cell Direct RT ، يمكن الحصول على عينات RNA في 7 دقائق فقط.
■ الطلب على العينة صغير ، حيث يمكن اختبار 10 خلايا.
■ إنتاجية عالية: يمكنها اكتشاف الحمض النووي الريبي بسرعة في الخلايا المزروعة في 384 ، 96 ، 24 ، 12 ، 6 ألواح.
■ يمكن لممحاة الحمض النووي أن تزيل الجينومات التي تم إصدارها بسرعة ، وتقلل بشكل كبير من التأثير على النتائج التجريبية اللاحقة.
■ يجعل نظام RT و qPCR المحسن النسخ العكسي RT-PCR المكون من خطوتين أكثر كفاءة و PCR أكثر تحديدًا وأكثر مقاومة لمثبطات تفاعل RT-qPCR.
تطبيق كيت
نطاق التطبيق: الخلايا المستزرعة.
- الحمض النووي الريبي الصادر عن تحلل العينة: ينطبق فقط على قالب RT-qPCR لهذه المجموعة.
- يمكن استخدام المجموعة للأغراض التالية: تحليل التعبير الجيني ، والتحقق من تأثير إسكات الجينات بوساطة سيرنا ، وفحص الأدوية ، وما إلى ذلك.
التخزين ومدة الصلاحية
يجب تخزين الجزء الأول من هذه المجموعة في 4℃؛يجب تخزين الجزء الثاني في -20 درجة مئوية.
يجب تخزين Foregene Protease Plus II في 4℃ ، لا تجمد عند -20 ℃.
الكاشف 2×يجب تخزين qPCR Mix-Taqman المباشر عند -20℃في الظلام؛إذا تم استخدامه بشكل متكرر ، فيمكن تخزينه أيضًا في 4℃ للتخزين قصير الأجل (يستخدم في غضون 10 أيام).
مبادئ تصميم الوقت الحقيقي PCR التمهيدي
التمهيدي الأمامي والعكس التمهيدي
بالنسبة لـ Real Time PCR ، يعد التصميم التمهيدي مهمًا جدًا.ترتبط المواد الأولية بخصوصية وكفاءة تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل ، ويمكن تصميمها بالرجوع إلى المبادئ التالية:
- طول التمهيدي: 18-30 نقطة أساس.
- محتوى GC: 40-60٪.
- قيمة Tm: يمكن لبرنامج تصميم Primer ، مثل Primer 5 ، أن يعطي قيمة Tm للبرايمر.يجب أن تكون قيم Tm للاشعال في المنبع والمصب أقرب ما يمكن.يمكن أيضًا استخدام صيغة حساب Tm: Tm = 4 ° C (G + C) + 2 ° C (A + T).عند إجراء PCR ، يتم تحديد درجة حرارة أقل من قيمة Tm التمهيدي البالغة 5 درجات مئوية كدرجة حرارة التلدين (يمكن أن تؤدي الزيادة المقابلة في درجة حرارة التلدين إلى زيادة خصوصية تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل).
- مواد التمهيدي ومنتجات PCR:
- يفضل أن يكون طول منتج تضخيم PCR التمهيدي 100-150bp.
- يجب تجنب استخدام البادئات المصممة في المنطقة الهيكلية الثانوية للقالب قدر الإمكان.
- تجنب تكوين قاعدتين أو أكثر من القواعد التكميلية بين النهايات الثلاثية للبادئات الأولية والنهائية.
- لا يمكن أن توجد القاعدة الطرفية التمهيدي 3 مع 3 G أو C متتالية إضافية.
- لا يمكن أن تحتوي البادئات نفسها على بنى تكميلية ، وإلا سيتم تشكيل هيكل دبوس الشعر ، مما يؤثر على تضخيم PCR.
- يجب توزيع ATCG بالتساوي قدر الإمكان في تسلسل التمهيدي ، ويجب تجنب القاعدة الطرفية 3 مثل T.
زائدة1 ： جell مباشرRT-QPCR مكونات المجموعةر حزمة المكملات
1- محلول تحلل الخلية
| محلول تحلل الخلية | |||
| مكونات الطقم (نظام تحلل 24 بئر / بئر) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ت | 500 ت | ||
| جزءأنا | العازلة CL | 20 مل | 100 مل |
| Foregene Protease Plus II | 400 ميكرولتر | 1 مل × 2 | |
| العازلة ST | 1 مل × 2 | 10 مل | |
| جزءثانيًا | ممحاة الحمض النووي | 400 ميكرولتر | 1 مل × 2 |
| RT ميكس | |
| مكونات الطقم (نظام تفاعل 20 ميكرولتر) | DRT-01011-B1 |
| 200 ت | |
| 5 × Direct RT Mix | 800 ميكرولتر |
| RNase خالية ddH2O | 1.7 مل × 2 |
| qPCR ميكس | ||
| مكونات الطقم (نظام تفاعل 20 ميكرولتر) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 ت | 1000 ت | |
| 2 × مباشر qPCR ميكس تاقمان | 1 مل × 2 | 1.7 مل × 6 |
| 20 × صبغة مرجعية ROX | 40 ميكرولتر | 200 ميكرولتر |
| RNase خالية ddH2O | 1.7 مل | 10 مل |
كتيبات التعليمات:
