طقم qPCR المباشر للخلايا RT - خلية تحلل خلية Taqman المباشرة جاهزة خطوة واحدة مجموعات qRT-PCR
الأوصاف
يستخدم هذا المنتج نظامًا عازلًا فريدًا للتحلل لإطلاق الحمض النووي الريبي سريعًا من عينات الخلايا المستزرعة لتفاعلات RT-qPCR ، والقضاء على عملية تنقية الحمض النووي الريبي المستهلكة للوقت والشاقة ، و 7 دقائق فقط للحصول على قالب RNA المطلوب ، مع 5 × Direct RT Mix ، 2 × Direct qPCR Mix-Taqman التي توفرها المجموعة يمكن بسرعة وكفاءة الحصول على نتائج PCR الكمية في الوقت الحقيقي.
5 × Direct RT Mix و 2 × Direct qPCR Mix-Taqman يتمتعان بتسامح قوي للمثبط ويمكنهما إجراء انعكاس فعال وتضخيم محدد باستخدام محللة العينة المراد قياسها كقالب.يحتوي الكاشف على النسخ العكسي Foregene Reverse Transcriptase و Hot D-Taq DNA Polymerase و dNTPs و MgCl2ومخزن التفاعل ومُحسِّن تفاعل البوليميراز المتسلسل ومُثبِّت ، والذي يمكن استخدامه مع محلول تحلل لاكتشاف العينات بسرعة وسهولة ، ويتميز بخصائص الحساسية العالية والنوعية والاستقرار.
تحديد
200×20μل Rxns ، 1000×20μل Rxns
مكونات الطقم
| سريع سهلTMالخلية المباشرة RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| مكونات الطقم 20 مايكرولتر نظام رد فعل qPCR | DRT-01021 | DRT-01022 | ملحوظة | |
| 200 ت | 1000 ت | |||
|
جزء I | العازلة CL | 4 مل | 20 مل | تحلل الخلية |
| Foregene Protease Plus II | 80 ميكرولتر | 400 ميكرولتر | ||
| العازلة ST | 400 ميكرولتر | 1 مل × 2 | ||
|
جزء II | ممحاة الحمض النووي | 80 ميكرولتر | 400 ميكرولتر | |
| 5 × Direct RT Mix * | 160 ميكرولتر | 800 ميكرولتر | RT | |
| 2 × مباشر qPCR ميكس تاقمان * | 1 مل × 2 | 1.7 مل × 6 | qPCR | |
| 20 × صبغة مرجعية ROX | 40 ميكرولتر | 200 ميكرولتر | ||
| RNase خالية ddH2O | 1.7 مل | 10 مل | ||
| كتيب التعليمات | 1 قطعة | 1 قطعة | ||
*:يمكن شراء تحلل الخلايا ، 5 × Direct RT Mix ، 2 × Direct qPCR Mix-Taqman بشكل منفصل
الميزات والمزايا
■بسيطة وفعالة: باستخدام تقنية Cell Direct RT ، يمكن الحصول على عينات RNA في 7 دقائق فقط.
■ الطلب على العينة صغير ، حيث يمكن اختبار 10 خلايا.
■ إنتاجية عالية: يمكنها اكتشاف الحمض النووي الريبي بسرعة في الخلايا المزروعة في 384 ، 96 ، 24 ، 12 ، 6 ألواح.
■ يمكن لممحاة الحمض النووي أن تزيل الجينومات التي تم إصدارها بسرعة ، وتقلل بشكل كبير من التأثير على النتائج التجريبية اللاحقة.
■ يجعل نظام RT و qPCR المحسن النسخ العكسي RT-PCR المكون من خطوتين أكثر كفاءة و PCR أكثر تحديدًا وأكثر مقاومة لمثبطات تفاعل RT-qPCR.
تطبيق كيت
نطاق التطبيق: الخلايا المستزرعة.
- الحمض النووي الريبي الصادر عن تحلل العينة: ينطبق فقط على قالب RT-qPCR لهذه المجموعة.
- يمكن استخدام المجموعة للأغراض التالية: تحليل التعبير الجيني ، والتحقق من تأثير إسكات الجينات بوساطة سيرنا ، وفحص الأدوية ، وما إلى ذلك.
التخزين ومدة الصلاحية
يجب تخزين الجزء الأول من هذه المجموعة في 4℃؛يجب تخزين الجزء الثاني في -20 درجة مئوية.
يجب تخزين Foregene Protease Plus II في 4℃ ، لا تجمد عند -20 ℃.
الكاشف 2×يجب تخزين qPCR Mix-Taqman المباشر عند -20℃في الظلام؛إذا تم استخدامه بشكل متكرر ، فيمكن تخزينه أيضًا في 4℃ للتخزين قصير الأجل (يستخدم في غضون 10 أيام).
مبادئ تصميم الوقت الحقيقي PCR التمهيدي
التمهيدي الأمامي والعكس التمهيدي
بالنسبة لـ Real Time PCR ، يعد التصميم التمهيدي مهمًا جدًا.ترتبط المواد الأولية بخصوصية وكفاءة تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل ، ويمكن تصميمها بالرجوع إلى المبادئ التالية:
- طول التمهيدي: 18-30 نقطة أساس.
- محتوى GC: 40-60٪.
- قيمة Tm: يمكن لبرنامج تصميم Primer ، مثل Primer 5 ، أن يعطي قيمة Tm للبرايمر.يجب أن تكون قيم Tm للاشعال في المنبع والمصب أقرب ما يمكن.يمكن أيضًا استخدام صيغة حساب Tm: Tm = 4 ° C (G + C) + 2 ° C (A + T).عند إجراء PCR ، يتم تحديد درجة حرارة أقل من قيمة Tm التمهيدي البالغة 5 درجات مئوية كدرجة حرارة التلدين (يمكن أن تؤدي الزيادة المقابلة في درجة حرارة التلدين إلى زيادة خصوصية تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل).
- مواد التمهيدي ومنتجات PCR:
- يفضل أن يكون طول منتج تضخيم PCR التمهيدي 100-150bp.
- يجب تجنب استخدام البادئات المصممة في المنطقة الهيكلية الثانوية للقالب قدر الإمكان.
- تجنب تكوين قاعدتين أو أكثر من القواعد التكميلية بين النهايات الثلاثية للبادئات الأولية والنهائية.
- لا يمكن أن توجد القاعدة الطرفية التمهيدي 3 مع 3 G أو C متتالية إضافية.
- لا يمكن أن تحتوي البادئات نفسها على بنى تكميلية ، وإلا سيتم تشكيل هيكل دبوس الشعر ، مما يؤثر على تضخيم PCR.
- يجب توزيع ATCG بالتساوي قدر الإمكان في تسلسل التمهيدي ، ويجب تجنب القاعدة الطرفية 3 مثل T.
زائدة1 ： جell مباشرRT-QPCR مكونات المجموعةر حزمة المكملات
1- محلول تحلل الخلية
| محلول تحلل الخلية | |||
| مكونات الطقم (نظام تحلل 24 بئر / بئر) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ت | 500 ت | ||
| جزءأنا | العازلة CL | 20 مل | 100 مل |
| Foregene Protease Plus II | 400 ميكرولتر | 1 مل × 2 | |
| العازلة ST | 1 مل × 2 | 10 مل | |
| جزءثانيًا | ممحاة الحمض النووي | 400 ميكرولتر | 1 مل × 2 |
| RT ميكس | |
| مكونات الطقم (نظام تفاعل 20 ميكرولتر) | DRT-01011-B1 |
| 200 ت | |
| 5 × Direct RT Mix | 800 ميكرولتر |
| RNase خالية ddH2O | 1.7 مل × 2 |
| qPCR ميكس | ||
| مكونات الطقم (نظام تفاعل 20 ميكرولتر) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 ت | 1000 ت | |
| 2 × مباشر qPCR ميكس تاقمان | 1 مل × 2 | 1.7 مل × 6 |
| 20 × صبغة مرجعية ROX | 40 ميكرولتر | 200 ميكرولتر |
| RNase خالية ddH2O | 1.7 مل | 10 مل |
كتيبات التعليمات:
