مجموعة RT-qPCR المباشرة III
وصف المجموعة:
◮Direct RT-qPCR Kit ، باستخدام Foreasy Reverse Transcriptase و Foreasy HS Taq DNA Polymerase التي طورتها Foregene ، مع مخزن مؤقت للتفاعل الفريد ، تجعل هذه المجموعة ذات مقاومة وتوافق قويين ، ويمكنها اختبار التفاعل مباشرة باستخدام نظام Foregene Lysis كقالب.يمكن أن تنطبق هذه المجموعة على مجموعة أدوات الكشف عن الحمض النووي COVID-19 وغيرها من تطوير مجموعة أدوات الكشف عن الحمض النووي للبكتيريا المسببة للأمراض.
وصف
توفر Direct RT-qPCR Kit مخزنًا مؤقتًا RT-qPCR معبأ بشكل منفصل (مع فورسي HS Taq DNA بوليميريز مختلط) وكفاءة عاليةForeasy Reverse Transcriptase (MMLV) ،مما يجعلها ملائمة لإنشاء مجموعات خلفية وتعديل النظام ， ضمن عملية تحقق بسيطة.
Direct RT-qPCR Kit ، باستخدام Foreasy Reverse Transcriptase و Foreasy HS Taq DNA Polymerase التي طورتها Foregene ، مع مخزن مؤقت للتفاعل الفريد ، تجعل هذه المجموعة ذات مقاومة وتوافق قويين ، ويمكنها اختبار التفاعل مباشرة باستخدام نظام Foregene Lysis كقالب.يمكن أن تنطبق هذه المجموعة على مجموعة أدوات الكشف عن الحمض النووي COVID-19 وغيرها من تطوير مجموعة أدوات الكشف عن الحمض النووي للبكتيريا المسببة للأمراض.
يمكن أن تكون هذه المجموعة مباشرة من مكونات منتج IVD ، باستخدامها بسهولة وسرعة.إنه يحتاج فقط إلى التحقق السهل ، دون التطوير مرة أخرى.
تحديد
500 طن ، 50000 طن
مكونات الطقم
| محتويات المجموعة (نظام رد فعل 20 ميكرولتر) | IM-05111-03 | IM-05112-03 |
| 500 ت | 50000 ت | |
| فورسي رالناسخ العكسي(200 وحدة /μL) | 50 ميكرولتر× 1 | 1 مل× 5 |
| 2 × qPCR مباشرميكس تقمان | 1 مل × 5 | 500 مل× 1 |
| تعليمات | 1 | 1 |
خطوات التشغيل
ج: تحضير القالب والكاشف
1. إعداد قالب الحمض النووي الريبي المحضر (يوصى باستخدام مجموعة أدوات سلسلة Foregene Total RNA Isolation Kit لاستخراج وتنقية قالب الحمض النووي الريبي) أو نموذج تكسير المنتج (يوصى باستخدام نظام تحلل Foregene) ، وأشعال محددة (10 ميكرومتر) وغيرها من المواد الاستهلاكية ذات الصلة ، والأداة.
2. ضع 2 × Direct RT-qPCR Buffer ، RNase-Free ddH2O و 20 × ROX Reference Dye (إذا لزم الأمر) في الصندوق مع الثلج ، مما يجعلها تذوب بشكل طبيعي ، وتخلط بلطف.
ب: إعداد نظام RT-qPCR
احصل على نصف حجم المخزن المؤقت للتفاعل لنظام التفاعل (على سبيل المثال ، إذا كان حجم النظام 20 ميكرولتر ، فإنه يحتاج إلى الحصول على 10 ميكرولتر 2 × Direct RT-qPCR Buffer). لالكمية المقابلة من الانزيم، نقترح ذلكنظام تفاعل M-MLV ： 10-30 U / 20 ميكرولتر,طقبوليميريز الحمض النووي：1-2 يو / 20 ميكرولتر نظام رد فعلهذا هو اقتراحنا ، يجب عليك اختباره وتعديله) ، أضف قالب RNA ، وأشعال وتحقيقات محددة ، وأضف ddH الخالي من RNase2O إلى 20 ميكرولتر.يمكن الإشارة إلى التحضير المحدد لنظام تفاعل RT-qPCR إلى الجدول التالي 1.
الجدول 1: تحضير نظام RT-qPCR
| عنصر | مقدار | التركيز النهائي |
| 2 × Direct RT-qPCR العازلة | 10 ميكرولتر | 1 × |
| Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV) | 10-30 يو | |
| Foreasy HS Taq DNA Polymerase | 1-2 يو | |
| التمهيدي الأمامي (10 ميكرومتر) | 0.8 ميكرولتر | 50-900 نانومتر |
| عكس التمهيدي (10 ميكرومتر) | 0.8 ميكرولتر | 50-900 نانومتر |
| دقق (4 ميكرومتر) | 1 ميكرولتر | 200 نانومتر |
| قالب (RNA أو Lysate) | X ميكرولتر | |
| 20 × صبغة مرجعية ROX | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6.4-X) ميكرولتر | |
| الحجم الكلي | 20 ميكرولتر |
ملحوظة: Forward Primer و Reverse Primer عبارة عن بادئات محددة للجين المستهدف.يمكن تعديل نظام qPCR وفقًا لنماذج تجريبية و PCR.نوصي باستخدام 400 نانومتر للتركيز النهائي لمعظم البادئات.اضبط حجم البادئات والمجسات المحددة وفقًا للتركيز المحضر والتركيز النهائي الموصى به ، من فضلك.
1 *: حدد التركيز النهائي المناسب للصبغة المرجعية ROX وفقًا لأدوات PCR الكمية المختلفة.يظهر تركيز صبغة مرجعية ROX الأمثل لأدوات PCR الكمية الشائعة في الجدول التالي:
| أدوات PCR الكمية | التركيز النهائي للصبغة المرجعية ROX |
| ABI PRISM 7000/7300/7700 / 7900HT / الخطوة الأولى ،إلخ. | 1 × (على سبيل المثال ، أضف 1 مايكرولتر 20 × صبغة مرجعية ROX في نظام تفاعل 20 ميكرولتر) |
| ABI 7500 ، 7500 Fast ، Stratagene Mx3000P ، Mx3005P و Mx4000 ، إلخ. | 0.5 × (على سبيل المثال ، أضف 0.5 مايكرولتر 20 × صبغة مرجعية ROX في نظام تفاعل 20 ميكرولتر) |
| جهاز Roche PCR ، جهاز Bio-Rad PCR ، جهاز Eppendorf الكمي PCR ، إلخ. | بدون صبغة مرجعية ROX |
التخزين ومدة الصلاحية
يجب تخزين الطقم عند -20 ± 5 ℃.يجب تخزينه على الفور في ثلاجة ثرموستاتي -20.فترة الصلاحية هي سنتين إذا تم تخزينها في حالة مناسبة.
